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日期:丛年』月兰日学位论文原创性声明嬲螋燃幽导师签名垒鱼学位论文版权使用授权书日期:翟年上月堑目日期:垄夷辍辉吕既本人郑重声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。作者签名:本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定:即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版;本人允许本学位论文被查阅和借阅;学校可以将本学位论文的全部或部分容编入有关数据库进行检索,可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。
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,并回收条目的::以一为基因模板,┰鯰带。,然后进行连接。将重组质粒转化至大肠杆菌薪欣┰觯粞粜钥寺【洌行」婺V柿L取。将提取的质粒进行酶切鉴定及庑蚣ā结果:⒔玊腜产物进行电泳,条带大小在甋左右,结果与预期结果一致。⒂肂、盖兄刈橹柿#=果与预期一致。⒔刈橹柿=蠨测序,将测序所得的序列和基因片段序列进行比对,显示构建序列与预期序列完全一致,一猅柿1泶镌靥骞菇ǔ晒Α结论:成功构建..表达质粒。关键词:;质粒表达载体构建博士学位论文
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第二部分大幅提高槐湫徒岢Π┫赴鸋园沙利铂的敏感性目的:探索在不同刺拢琓越岢Π┫赴律忱敏感性的影响方法:选取吧徒岢Π┫赴鸋和槐湫徒岢Π细胞附录进行对照研究。,两株细胞生长速度的变化和奥沙利铂的变化。结果:⒆H緋甖质粒后,两株细胞的和蛋白质表达水平均上升,提示转染成功。⒆H緋—质粒后,从第炜J忌っ飨约涌欤降天时,转染组的细胞数约为亲代组细胞数的倍。而从第炱鹕に俣缺惹状赴趼天时,转染组的细胞数约为亲代组细胞数的%。⒆H.—质粒后,的奥沙利铂从./岣叩疞,耐药指数岫冉档土薍对奥沙利铂的敏感性;而的奥沙利铂从疞降至疞,耐药指数灾岣吡薍园律忱拿舾行浴结论:⒃诮岢Π┲校琓员泶镆吧蚉的细胞,表现为促进肿瘤生长作用;而对表达突变型南赴硐治R种浦瘤生长的作用。⒃谝吧蚉结肠癌细胞中,阻断δ苣芄辉黾酉赴园律忱哪鸵ú幌灾L崾疽吧和博士学位论文中文摘要
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第三部分一耐药细胞模型的构建型氚律忱舾行郧岫认喙亍、在突变型岢Π┫赴中,能够大幅提高对奥沙利铂的敏感性。提示可能通过结合组阻断突变型δ芾刺岣逪杂诎律利铂的敏感性,突变型氚律忱鸵└叨认喙亍关键词:;;;奥沙利铂;槐目的:构建槐湫徒岢Π┫赴鸋桶律忱P方法:利用低浓度持续培养法构建结肠癌耐奥沙利铂细胞模型。首先在奥沙利铂浓度为疞/迸嘌鳫赴个星期,宜到细胞出现成倍数增长时,再在疞继续培养个星期,传代。将奥沙利铂浓度提高至疞。按此循环,将奥沙利铂的浓度逐步提高直至/:⒊晒竦媚芄辉诎律忱ǘ任///保榷ㄉさ娜昴鸵┫赴P停直鹈狧甇疞,一一疞,.一/、三株耐药细胞模型奥沙利铂分别为.//鸵┲甘直鹞.,.,.。⑺孀拍鸵┡ǘ鹊脑加,三株耐药细胞中的表达逐渐增加渲蠬籓疞疞疞博士学位论文中文摘要/
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,蛋白质水平上升至亲代的。结论:成功建立一一疞,,一./昴鸵┫赴P汀NO乱徊窖芯縏谕变型岢Π┠桶律忱械淖饔眉捌浠频於嘶关键词:;奥沙利铂;耐药细胞模型;;槐目的:。方法:利用椒ú舛ㄗH緋甖甌柿前后,一./赴律忱琁谋浠@妹庖吖渤淀的方法检测槐湫徒岢Π┫赴鸋赥屯槐湫蚉蛋白之间的相互作用。利用实时荧光定量蛍椒ǎ检测随耐药浓度的增加,三株耐药细胞模型中,谋泶变化情况。,蚆泶锏谋浠结果:籓疞耐药细胞转染一质粒后,奥沙利铂从疞下降至./耐药株指数从陆抵.。成功逆转结肠癌耐药模型对奥沙利博士学位论文中文摘要
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耐药细胞中,表达明显下降鳵铂的耐药。⒃赑突变型结肠癌细胞中和突变型鞍紫嗷ソ岷稀、随着耐药浓度的增加,表达逐渐下降渲蠬籓疞水平下降至亲代的%,蛋白质水平下降至亲代的%琍表达逐渐增高渲蠬籓/水平上升至亲代的倍,蛋白质水平上升至亲代的倍⒆H緋甖猅柿:螅贖籓疞表达水平下降至耐药细胞的%,蛋白质表达水平下降至耐药细胞的%籔表达无明显改变。结论:⒎谴幼B妓阶柚雇槐湫蚉的功能,其发挥作用的方式,主要是通过与突变型锢斫岷侠醋柚雇槐湫纳锕δ堋、在胞浆内结