文档介绍：蛋白A(ProteinA)酶联检测试剂盒(可拆卸)说明书产品目录编号#AB000109C此试剂盒包含检测生物药物内蛋白A(ProteinA)杂质所需要的全部组分。请在操作之前仔细阅读此说明书。本试剂盒只能用于科学研究,不能用于医学诊断。背景资料在单克隆抗体药物的纯化过程中,以蛋白A(ProteinA)为基础的亲合层析是广泛应用的纯化方法之一,单克隆抗体可以有效的在此步骤中得到纯化。蛋白A的最初来源是细菌(usaureus)细胞壁中的一个蛋白质,研究表明蛋白A可能对人体有潜在的危害,它的生物学作用包括刺激人体多种细胞素(IFNγ,TNFα,IL-1α,IL-1β,IL-2,IL-4)的释放。由于在蛋白A亲合层析柱使用过程中会有微量的蛋白A从层析柱上脱落下来,因此用精确灵敏的方法来确证单克隆抗体药物中蛋白A的残留处于一个较低的和稳定的水平是单克隆抗体药物的质量标准之一。蛋白A(ProteinA)酶联检测试剂盒是用来定量分析生物药物中蛋白A杂质的试剂盒。首先,用不同浓度的蛋白A标准蛋白制作一条标准曲线,然后再根据标准曲线来分析生物药物中残留蛋白A的含量。具体方法为:先将蛋白A标准蛋白或者待测样品适当稀释后加入已包被好抗蛋白A抗体的96孔平板中。,蛋白A与已经固定在平板上的抗体结合形成抗原-抗体复合物。此复合物被随后加入的生物素标记的抗蛋白A的抗体结合并进一步形成更高级的复合物,反应45分钟后洗去未结合的物质。再加入链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物(Streptavidin-HRPConjugate),静置30分钟。因链霉亲合素可以与任何带生物素标记的抗体相结合,从而使链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物连接到平板上。接下来冲洗掉未结合的物质,加入TMB底物。固相上的酶催化底物产生颜色反应,待颜色反应一段时间后,终止反应。用酶标仪在450nm波长下测定其结果,此结果能间接地反应结合到平板上的蛋白A数量的多少。根据蛋白A标准曲线定量分析生物药物中残留蛋白A的含量。(可拆卸)一个包被了兔抗蛋白A抗体的可拆卸平板。检测盒AB-000109C(一个可拆卸平板)(ProteinAStandards)用一种特殊的稀释液将蛋白A标准品稀释为七个浓度,/ml(两倍递减),另外包括一个空白对照样品。检测盒AB-000109C(1250μl/管)(10xPBS-T)用去离子水将十倍磷酸缓冲液10倍稀释至450ml(1xPBS-T),再用此溶液洗脱平板以及配置报告抗体、链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物稀释液和样品稀释液。(%Tween-20)。检测盒AB-000109C(45ml)。(position)将稀释液组分全部加到35ml的1xPBS-T溶液中溶解,混匀,用作报告抗体、链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物稀释液。从稀释好的溶液中取1ml用1xPBS-T稀释50倍得50ml溶液,作为待测样品和回收率样品的稀释液。检测盒AB-000109C()。(ReportingAntibody)生物素标记过的抗蛋白A的抗体检测盒AB-000109C(150μl/管),用稀释液(15ml)