文档介绍：Med19在人胃癌中的表达及其临床意义
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:丁相福黄国民李俊安房学东
【摘要】目的研究Med19基因在人胃癌组织中的表达情况及临床意义。方法应用免疫组化和RTPCR方法检测Med19 基因在胃癌组织、癌旁胃组织及正常胃组织中的表达。%(43/60),显著高于癌旁胃组织和正常胃组织()。癌旁胃组织和正常胃组织中Med19多为阴性表达,少数为弱阳性表达,二者间差异无显著性(P )。Med19的表达与胃癌的细胞分化程度、淋巴结转移情况、TNM分期相关(),而在不同年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度的胃癌样本中表达差异无显著性(P )。结论 Med19参与了胃癌的发生、发展过程,有望成为一个新的肿瘤治疗靶向因子。
【关键词】 MED19;胃癌;基因表达
胃癌的发生主要与癌基因的突变、扩增、过度表达以及抑癌基因的突变、失活等密切相关。中介体亚单位Med19 亚基在人类中的同源基因为肺癌转移相关基因LCMR1,目前对其功能研究较少。本研究观察胃癌组织中Med19蛋白的表达及其与临床病理特征的关系,探讨Med19表达与胃癌发生、发展的相关性。
1 材料与方法
对象与试剂
60例人胃癌组织标本来源于我院普外科,其中男36例,女24例,,所有标本均经病理证实为胃腺癌,且术前均未接受放疗和化疗。组织学检查为正常胃黏膜者20例源于胃镜活检标本。病理类型:高分化腺癌13例,中分化腺癌9例,低分化腺癌26例,未分化癌12例。TNM分期:Ⅰ期8例,Ⅱ期13例,Ⅲ期19例,Ⅳ期20例。本组60例均获临床随访,随访时间48~62个月,患者生存时间8~62个月,中位生存时间37个月。主要试剂Med19购于美国Cayman公司,Med19上游引物:5′TGACAGGCAGCACGAATC3′;下游引物:5′CAGGTCAGGCAGGAAGTTAC3′。内参照基因βactin引物序列:上游引物:5′AGATCA3′;下游引物:5′GATCTTCATGAGGTAGTCAG3′;由上海生物工程有限公司合成。
试验方法
免疫组织化学方法检测Med19蛋白表达
按SP免疫试剂盒说明书操作。阳性染色定位于肿瘤细胞胞核与胞浆,呈棕黄色颗粒状分布。在400倍视野下计数着色细胞占视野细胞总数的百分数,共计数5个视野,取平均值。肿瘤细胞阳性染色≤10%为阴性表达,10%为阳性表达。
RTPCR方法检测Med19 mRNA表达
20例手术切除的新鲜胃癌组织和对应癌旁胃组织及正常胃组织置于液氮中冻存备用。提取mRNA进行定量和定性分析。RTPCR:采用Trizol一步法抽提胃癌组织总RNA,经DNA酶消化后逆转录。逆转录和PCR均设阴性对照。设定程序为两步法实时定量。预变性95℃,15 s;之后每一步变性95℃,5 s;退火延伸60℃,30 s;共进行45个循环。每次在延伸阶段读取吸光值。PCR结束后,在95℃变性1 min。然后冷却至55℃,使DNA 双链充分结合。从55℃开始到95℃,℃,保持