文档介绍：MMP9基因多态性与IgA肾病病理改变的关系
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【摘要】目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP9) C1562T基因多态性与IgA肾病病理改变间的关系。方法应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析技术检测88例IgA肾病患者的MMP9 C1562T多态性,进一步研究其与IgA肾病病理分级间的相关关系。结果 IgA肾病患者MMP9 C基因型65例(%),CT基因型23例(%),TT基因型缺如。其基因型与IgA肾病病理分级比较,差异无显著性()。结论 MMP9 C1562T基因多态性可能不影响IgA肾病的病理改变和预后。
【关键词】基质金属蛋白酶9 C1562T基因;遗传多态性;IgA肾病; 病理改变
长期以来,肾小球疾病的易感性和预后与遗传因素之间的关系,一直是肾脏病学界广泛关注的问题。基质金属蛋白酶家族是肾脏内主要的基质降解酶体系,主要参与血管基底膜主要结构成分——Ⅳ型胶原的降解。作为降解血管基底膜中Ⅳ型胶原的主要酶类,其活性的高低直接影响着肾小球内细胞外基质的表达量与局部沉积。肾脏疾病患者肾组织表达MMP
9增高,有助于消除产生过多的细胞外基质,是肾组织纤维化形成的一种自身抑制反应〔1〕。已发现MMP9主要表达于肾小球的足细胞和内皮细胞,且在IgA肾病增殖性肾小球内表达显著增多,在硬化性肾小球内表达减少〔2〕。而另一个突出的事实是,IgA肾病即便是具有大体相同的临床表现,比如高血压、蛋白尿,且应用相同的治疗措施,但临床疗效和预后却不尽相同。于是推测IgA肾病除了受非遗传因素的影响外,还受遗传因素的影响。目前已明确MMP9基因存在多态性,但没有关于MMP9基因多态性(1562C/T)与肾脏疾病的相关性报道。笔者以IgA肾病为研究对象,检测了其MMP9基因C1562T多态性的分布,并与IgA肾病的病理改变进行比较,从而探讨MMP9基因是否影响IgA肾病的病理改变和预后。
1 资料与方法
研究对象选择2005至2006年在本校第一医院和第二医院住院并通过肾活检确诊的IgA肾病患者88例。排除心、脑、肝及糖尿病等疾病。其中年龄20~68岁,平均(±)岁。
方法
肾脏常规病理和免疫荧光检查 88例肾活检标本均行HE、PAS、PASM、MASSON染色,光镜下观察肾小球、肾小管间质病变的性质和程度;冰冻切片下直接免疫荧光染色方法,观察IgA、IgM、IgG、C3、C4、C1q及纤维蛋白原在肾脏中的沉积部位、分布特点及强度。按Lee分级标准将肾脏改变分为
Ⅰ~Ⅴ级。
基因组DNA的提取采静脉血4 ml,EDTANa2抗凝,按常规酚/氯仿/乙醇法提取白细胞基因组DNA。
引物由上海生化生物工程公司合成。引物1:5′3′;引物2:5′GGCATA3′。
PCR扩增 10×Buffer 3 μl,dNTPMix μl,引物1、2各1 μl,DNA模板 3~10 μl,~ μl,耐热Taq DNA聚合酶(大连TAKARA公司) μl(终体积30 μl)