文档介绍：免疫学检测原理
第一节
基于抗原-抗体反应的检测方法
学****目的:
一、掌握抗原-抗体结合反应的特点
二、了解影响抗原-抗体反应的因素
三、学****抗原-抗体反应的基本检测方法
抗原-抗体反应:
指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。
主要应用:
用已知抗原检测未知抗体
用已知抗体检测未知抗原
定性或定量检测体内各种大分子
物质
用已知抗体检测某些药物、激素和
炎性介质等各种半抗原物质
一、抗原-抗体结合反应的特点
高度特异性
定义:一种抗原通常仅能与由它刺激所产生的抗体
结合。
分子基础:抗原表位与抗体的抗原结合部位间存在
分子结构的互补性,二者可特异性结合。
交叉反应
共同抗原决定基刺激机体产生的抗
体分别与两种抗原( 共同抗原) 结合发
生反应。
机理:具有相同的抗原表位
抗原-抗体结合的带现象与可见性
前带现象:抗体过剩
后带现象:抗原过剩
网格复合体:抗原、抗体的数量比例合适。
反应体系基本不存在游离的抗原或抗体,形成肉眼可见
的反应物(沉淀物或凝集物)。
可逆性
抗原-抗体反应为分子表面的非共价键结合,结合虽稳定但可逆。
过剩方结合价未被完全占据,成游离小分子复合物或解离,不可见
二、抗原-抗体反应的影响因素
内因:1)抗体的特异性和亲和力
2)抗原理化性质、抗原表位多寡和种类
3)抗原抗体的浓度、比例
(影响最大,决定因素)
外因:1)电解质使抗原-抗体复合物失
去电荷而凝集,出现可见反应
2)酸碱度最适pH6~8
3)温度适宜(可增加抗原
与抗体的碰撞机会,加快结合速度)
三、抗原-抗体反应的基本检测方法
凝集反应:细菌或红细胞等颗粒性抗原与相应抗体直接反应出现凝集。
沉淀反应:可溶性抗原与相应抗体结合后,
在一定条件下出现肉眼可见的沉淀。
补体参与的反应:应用抗体与红细胞表面抗
原结合,激活反应体系中的补体成分,
根据溶血现象判定试验结果。
免疫标记技术:用荧光素、酶、
放射性核素或化学发光物质等标
记抗体或抗原,进行抗原-抗体
反应的检测.
单向免疫扩散:
特点:定性半定量
用途:可用于测定血清IgG IgM IgA 和C3等的含量
原理:沉淀环的直径与抗原含量呈正相关
操作:
铺板
↓
打孔
↓
加样
↓
放湿盒
↓
看结果
双向免疫扩散
用途:鉴定两种抗原是否相同
特点:定性半定量
操作:
铺板
↓
打孔
↓
加样
↓
放湿盒
↓
看结果