文档介绍：:..酶联免疫吸附试验过程中的影响因素分析酶联免疫吸附试验过程中的影响因素分析【关键词】ELISA影响因索【+2【文献标识码】A【文章编号】1004-7484(2010)03-00-01酶联免疫吸附试验(ELISA)自1971年问世以来,以其敏感性高,特异性强,操作简便,安全,而广泛应用于临床诊断,开创了免疫学诊断的新纪元。但ELISA测定屮影响因索较多,有时可见到一些假阳性或假阴性,本文就ELISA过程中的影响因素做如下讨论。、储存、处理不当造成,如样品溶血、被细菌污染、标本凝集不全等。溶血标本,红细胞溶解破裂,释放出血红素,血红素中的铁吓咻是过氧化物酶的类似物,以HRP(辣根过氧化酶)为标记ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色,形成假阳性。有国内报道酶免HbsAg试剂检测溶血标本时可造成假阳性[1];如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP而影响结果,形成假阳性[2];标本在冰箱中保存时间过长易导致血清IgG聚合,使间接法的试剂本底加深,一般血清置4°C冰箱5天内完成测试,如需保存一周以上则要-20°C冰冻保存,建议保存6个月为宜,融解时应上下颠倒充分混匀,同时避免气泡[3];标本凝集不全时,血清中会残留部分纤维蛋白原,也易造成假阳性,最好将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟。(RF)、黄疸等。类风湿因子作用于多种动物以及人IgGFc段的自身抗体,能充当抗原成分与固相及酶标抗体反应,从而形成假阳性;黄疸血标本中常含有内源性过氧化物酶,如用HRP为标记物,就有可能产生假阳性。ELISA的灵敏度>lng/ml水平上,因此,标本间的污染要尽量避免,尤其不应与生化试验用同一管标本•,资料显示,%-99・3%,78%-89%存在较大差杲[4]。有的厂家酶标板孔间吸光度(A)值大于15%;标记酶的活性及显色液的稳定比较差。使用质劣的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。从冰箱取出试剂及冷藏的待检标本,室温下平衡30分钟再进行测试,剩余试剂及时封存,置冰箱备用。,直接影响检测结果。由于吸嘴构造特殊导致清洗困难,因此应使用一次性吸嘴。加样器也要经常清洗,定期校准。每次加样应更换吸嘴,做到一人一吸头,以免发生交叉污染;干吸头预先在血清中抽吸2-3次。加样应用微量移液器(加样枪)按规定的量加入微孔板的1/3处,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。样本稀释,目的是为了减少非特异性反应,所以一定要先加稀释液后加样木,特别注意加样后要在微量振荡器上振荡30秒钟,同吋注意防止液体溢出。如后面操作步骤中加二种以上试剂时均需振荡混匀。如果标本量不够一板,在掰取微孔反应条时,手指不要接触反应条底部,以免污染底部,使透光率减少,结果的吸光度值升高,形成假阳性。如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去1滴或2滴有气泡的试剂后加样。