文档介绍：实验十
DNA的限制性
内切酶酶切
一、实验目的
了解核酸限制性内切酶的特点及其对DNA的酶切过程
学会设计构建体外重组DNA分子的方法,并根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶以及DNA的酶切技术
二、实验原理
EcoRI限制性内切酶的识别与切割顺序为:
5’……G↓AATTC……3’
3’……CTTAA↑G……5’
Xhol I限制性内切酶的识别与切割顺序为:
5’……C↓TCGAG……3’
3’……TAGCT↑C……5’
三、实验材料
仪器:水浴锅、制冰机、离心机、电泳设备、各式移液枪、核酸紫外检测仪等。
、移液枪枪头等。
DNA样品:上一个实验获得的质粒DNA
限制性内切酶Xhol I和EcoR I(Takara)
四、实验步骤
酶切体系:
质粒DNA 5ul
EcoRⅠ 1ul
Xhol Ⅰ 1ul
2×Buffer H 2ul
Sw 11ul
Total 20ul
用微量移液枪(20微升)依次吸取
SW
10倍酶切缓冲液
DNA
EcoR I
Xhol I
,在振荡器上充分混匀2秒钟,立即于离心机内离心一下,以将管壁上的液体集中于管底。
将离心管放置37℃水浴锅中反应3小时。在酶切反应的同时,%的琼脂糖凝胶,并准备好电泳装置。
五、实验结果
根据电泳结果,描述酶切的结果与效果。