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DNA提取方法.doc

上传人:文库旗舰店 2019/9/26 文件大小:23 KB

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文档介绍

文档介绍:一、移液器使用移液器(也称作“枪”)是所有分子实验操作不可或缺的工具,其正确使用是顺利开展各项实验的先决条件。为保证实验结果的准确性和稳定性,同时延长移液器的使用寿命,请大家细心操作并遵守以下使用规则和注意事项:,只有完全准确掌握移液器使用规则后方可独立使用移液器。,调整刻度时,注意看移液器刻度表,不要超过最大刻度。,用力不要过猛,以免吸头难以脱卸,同时损坏移液器。,注意要慢慢向上释放控制按钮以免吸入速度过快导致液体进入移液器内。,更不能倒放。,请装配多个叠加的吸头,且调整刻度不超过移液器最大量程的一半。,务必调到最大刻度,并稳妥地放回对应的移液器架上。,如不小心使移液器表面沾到液体,请及时清洗干净;如不小心将液体吸入移液器内,应及时清洗。;严禁不熟悉移液器构造者私自校对移液器刻度。第一节叶片总DNA的提取一、(牌子和离心管的编号)和挂牌,务必保证离心管中的叶片是来自于同一编号单株,编号切勿混淆;,所取样品尽量为幼嫩叶片组织,并尽量保证全程低温(使用冰袋或碎冰);,尽量使样品不沾水及泥土。,切记将袋内空气排尽,以免在–70℃保存时塑料袋破裂导致样品混合。二、-HCl(,)-(,)%-HCl()()20gCTAB加ddH2O定容至1L,灭菌后即可用于DNA的提取。.76%Ethanol(含10mMNH4AC)760ml无水乙醇和2ml5M/LNH4AC,(),:1吸取22ml异戊醇加到500ml三***,然后在沸水中煮10min,冷却,存于-20℃三、)取10g左右的叶片放在-70℃冰箱冷冻备用,写好编号;2)取5g叶片用液氮研磨成粉末状后装入50ml离心管中(最好为离心管体积的1/3左右),盖好后马上放在冰上或是4℃冰箱内;3)将离心管用泡沫架(实验室自制)支住放入55~60℃的水浴锅中水浴60分钟,加入预热好的CTAB溶液20~25ml(大约至离心管的1/2),用筷子搅拌每10分钟1次(要小心,防止污染);4)水浴完后盖紧盖子,轻轻放置于通风厨中室温冷却(大约30~60分钟);5)加入等体积的24:1溶液于管中,轻轻混匀数分钟,在3000~3200rpm离心15分钟;6)取上清夜转入另