文档介绍:摘要】目的探讨原发性肺腺癌表皮生长因子受体(EGFR)基因突变特点,及其与临床特征(性别、临床分期、吸烟情况)的关系。方法采用PCR扩增和基因测序,检测133例原发性肺腺癌EGFR外显子18,19,20和21的突变情况,同时分析其突变与临床特征的关系。结果133例中检测到EGFR基因突变50例(%,50/133),EGFR基因突变与性别和吸烟史相关,与临床分期无关。结论使用EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗前进行EGFR基因检测非常必要。【关键词】EGFR;肺腺癌;基因突变表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)是一种受体型酪氨酸激酶,在许多肿瘤中过表达和(或)发生突变,通过信号转导控制肿瘤生长,并与新生血管生成、肿瘤的侵袭和转移等有密切的关系〔1〕。已知EGFR的突变是治疗非小细胞肺癌的重要因素,很多医药公司研究出了EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosinekinaseinhibitors,TKI)的药物,以gefitinib和erlotinib为代表,在非小细胞肺癌,特别是在肺腺癌的治疗中显示出很好的抗肿瘤的疗效〔2,3〕。EGFR的基因突变作为使用药物是否有效的一个重要因素。直到最近的研究发现,EGFR的基因突变仍存在于外显子18~21,不同外显子的突变将导致构象变化,改变和增强蛋白的活性,同样增强对TKI的敏感性〔4~6〕。TKI通过与ATP竞争结合EGFR胞内酪氨酸激酶区,阻止酪氨酸残基磷酸化,从而阻止EGFR信号通路的传导,最终达到抑制肿瘤增殖、转移、血管生成等一系列肿瘤细胞生物活动。本研究通过检测肺腺癌患者EGFR的突变情况,以及与临床特征之间的关系,为筛选最合适的病人进行有针对性的靶向治疗提供依据,以避免不合理用药。,其中男∶女=72∶61。TNM分期(Ⅰ~Ⅳ):Ⅰ期(T12N0M0)55例,Ⅱ期(T12N1M0,T3N0M0)39例,Ⅲ期(T4N0M0,任何TN3M0)31例,Ⅳ期(任何T任何NM1)8例。根据吸烟史分为:有吸烟史63人,无吸烟史70人。,切除组织周围多余石蜡后,;加入1ml二甲苯,微微摇动,换液3次,总时间约12h;用不同浓度乙醇梯度水化,离心,用TE浸洗1次,30min,离心弃上清。一次加入TE200μl,10%SDS20μl,蛋白酶K(10mg/ml)3μl,37℃过夜;使用ToyoboDNA抽提试剂盒抽提经消化的组织。离心分离,室温,吸上清约100μl转入新Eppendorf管中。样品上清液中加入750μl溶解吸附液,40μl磁珠,旋涡混合器震动10min,置管于磁性台架30s使磁珠聚集然后去除上清液,Eppendorf管中添加900μl洗净液,使用旋涡混合器剧烈震荡5s,使磁珠均匀分散开;置管于磁性台架30s使磁珠聚集,去除上清液,加入100μl灭菌水,旋涡混合器剧烈震荡10min;聚集磁珠,;%琼脂糖电泳,检验DNA质量。PCR方法扩增EGFR基因外显子18、19、20和21,引物序列分别为18上游:ggcgtggaa