文档介绍：xxx菌XX酶基因工程菌的构建与发酵优化硕士学位论文答辩研究生:XXX指导老师:xxx教授xxx副教授xxx副教授碱性果胶酶(PGL,. )可在高pH条件下以反式消去作用断开果胶聚合物主链,裂解产物为△4:5不饱和的寡聚半乳糖醛酸碱性果胶酶概述碱性果胶酯裂解酶主要来源于细菌和霉菌,其中细菌以Bacillus和Erwinia为主纺织行业不同来源的PGL分子量差别较大,范围为23-74kDa,最适pH 为8-11,其生化特性的差异可能是多种形式果胶存在的原因其他领域食品行业纺织品前处理的酶法工艺流程??生物法节能、水,低污染??提高产品质量??环境污染和能源危机??纺织工业高污染、高能耗SingeingDesizing ScouringBleaching退浆精练角质和果胶质漂白淀粉酶/PVA降解酶角质酶/碱性果胶酶过氧化氢酶上浆碱性果胶酶概述国内外碱性果胶酶基因工程菌研究情况宿主载体培养策略发酵时间(h)DCW(g L-1)PGL 酶活(U ml-1)生产强度(U L-1h-1)参考文献P. pastorisX- (Liu et al., 2006)P. pastorisGS 115Invitrogen山梨醇和甲醇混合流加低温诱导961431593 (Wang et al., 2010)E. coli BL21 (DE3)pET22b(+)DO-stat 甘油流加培养温度37 oC13837a,b, (Matsumoto et al., 2002)E. coli Turner (DE3) plac IpET28a(+),(Zhao et al., 2007)E. coli JM109pHsh分批发酵温度诱导型菌株252022 (Zhuge et al., 2007)毕赤酵母?发酵周期长?工艺流程复杂?低温诱导能耗高原核表达体系?酶活水平高?工艺流程简单?发酵周期短异源蛋白分泌表达目的蛋白自身特性过程控制策略表达系统特性培养基组成流加策略诱导方法诱导后流加策略VS异源蛋白分泌表达重组大肠杆菌的分泌表达异源蛋白分泌表达目的蛋白自身特性过程控制策略表达系统特性培养基组成流加策略诱导方法诱导后流加策略VS异源蛋白分泌表达重组大肠杆菌的分泌表达生物量比产率分泌比率After胞外PGL胞内PGL包涵体胞外PGL胞内PGL包涵体Before研究思路大肠杆菌枯草芽孢杆菌摇瓶水平发酵罐水平摇瓶水平1. 碱性果胶酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达2. 流加培养过程诱导时机的研究4. 碱性果胶酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达5. 重组碱性果胶酶粗酶性质的初步研究原核宿主表达体系菌体量比生产分泌比率1. 碱性果胶酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达Digestion and ligationATGpET20b(+)/pglpglFnew-S/Fnew-APCRATGTAABacillus sp. WSHB04-02 genomic DNApgl KbPGL基因PCR扩增片段鉴定重组质粒酶切验证(bp)20001000750 1 M 26371208(bp)20001000750 1 M 1. 小结发酵上清SDS-PAGE电泳分析PL(43kDa) kDa PGL(kDa) M ?将PGL-1638序列进行测序,得到Bacillus sp. WSHB04-02的PGL相关1638 bp的基因,将其CDS部分(1263 bp)在NCBI进行BALST分析,表明本研究克隆到的PGL基因与Bacillussubtilis SO113(NCBI Accession NO. X74880)的该基因同源性为98%,具有14个差别核苷酸.?将载体pET-20b(+)/pgl转化E. coli BL21(DE3),得到基因工程菌E. coli BL21(DE3) (pET-20b(+)/pgl) ,且测序结果和SDS-. 碱性果胶酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达2. 流加培养过程诱导时机的研究4. 碱性果胶酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达5. 重组碱性果胶酶粗酶性质的初步研究原核宿主表达体系菌体生长目的蛋白表达量