文档介绍：*实验一牛乳中酪蛋白的制备与鉴定请将教室水浴锅打开,温度调至40℃。并将乙酸-乙酸钠缓冲液(1-2瓶/室)放入水浴锅内,预热至40℃。实验结束后务必断开电源。实验结束后,务必将使用过的玻璃器皿洗净、晾干、放回原处。【温馨提示】*(1)学****从牛乳中制备酪蛋白的方法。(2)了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。(3)验证蛋白质的双缩脲反应性质。(4)学****和掌握蛋白质双缩脲反应的原理和方法。一、实验目的二、实验原理牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物,-。利用等电点时溶解度最低的原理,-,酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物,***除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。、实验原理两分子尿素加热到180℃左右时,生成双缩脲并放出一分子氮,双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物,此反应称为双缩脲反应。、实验原理N端C端蛋白质分子中有肽键,其结构与双缩脲结构相似,因此,蛋白质在碱性环境中也能与Cu2+结合也发生双缩脲反应,生成紫红色化合物。由于,紫红色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。颜色深浅可在540nm比色测定,故可用此法来测定蛋白质含量。*三、仪器和试剂1、仪器:恒温水浴锅、低速离心机、托盘天平、电子天平、酒精灯等。1支25mL试管、搅拌棒、15mL离心管、滤纸。7支15mL试管。移液管、吸耳球、移液枪(200uL)、枪头(200uL)。2、材料与试剂:牛奶乙酸-乙酸钠缓冲液()、1%氢氧化钠、10%乙酸、蒸馏水、无水乙醇。蒸馏水、10%***化钠、%碳酸钠、、%盐酸、饱和氢氧化钙、双缩脲试剂。尿素、双缩脲试剂。(教师演示用)*四、实验步骤1、酪蛋白的制备:(1)量取10mL牛奶置于25mL刻度试管中,水浴中加热至40℃(约5min)。(2)在搅拌下慢慢加入10mL预热至40℃的乙酸-乙酸钠缓冲液()。-(可选择1%氢氧化钠或10%乙酸溶液进行调整,注意:缓慢滴加)。40℃保温10min,使沉淀完全。(3)将上述悬浮液冷却至室温。2000r/min离心5min,弃去上清液。*四、实验步骤1、酪蛋白的制备:(3)往沉淀物中加入5mL蒸馏水,混匀后2000r/min离心5min,弃去上清液。(4)将洗净的沉淀物加入3mL无水乙醇,混匀后2000r/min离心5min,弃去上清液,得到酪蛋白粗制品。(5)将沉淀物全部摊开在已称过重的滤纸上,置于25℃烘箱中烘干。(6)准确称重,计算牛乳中酪蛋白含量(g/10mL),,求出实际得率。*四、实验步骤2、酪蛋白溶解度的鉴定:取6支15mL试管,分别加入蒸馏水、10%***化钠、%碳酸钠、、%盐酸及饱和氢氧化钙各1mL。于每管中加入少量相同质量的酪蛋白粉末(25℃烘箱中烘干的酪蛋白粉末),不断摇荡,观察并记录各管中酪蛋白的溶解度。*四、实验步骤3、酪蛋白的颜色反应(双缩脲反应):此步骤由教师演示:取少量尿素结晶,放入干燥的试管,微火加热使尿素熔化,熔化的尿素开始硬化时停止加热,尿素放出氮,形成双缩脲。冷却后,加入1mL双缩脲溶液,振荡,观察实验现象。[制备双缩脲+双缩脲溶液(1%CuSO4+酒石酸加纳+1%KOH)=紫红色]向1支15mL试管中加入少量酪蛋白溶液,加入1mL双缩脲溶液,随加随摇,观察实验现象。[制备酪蛋白+双缩脲溶液(1%CuSO4+酒石酸加纳+1%KOH)=?]