文档介绍：高效液相色谱法测定维生素C的含量【摘要】高效液相色谱法已经成为解决生命科学、医药学发展中各种难题的重要手段,在实验室中也广泛应用于物质的定性定量分析。本实验中利用高效液相色谱法对维生素C进行定量分析,所采用的定量分析方法为外标法,通过做出标准溶液浓度与峰面积的标准曲线进而对样品中的维生素C进行定量检测。【关键词】高效液相色谱法、维生素C、含量1、引言维生素C(Vitamin C, Vc)又叫抗坏血酸,是一种水溶性维生素。Vc在体内参与多种反应,如氧化还原过程,在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。人体内缺乏Vc时容易导致坏血病。同时,由于Vc是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成,它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。Vc在蔬果中普遍存在,尤其是柑桔类水果中含量较高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中Vc含量在50-300mg/100g。溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。高效液相色谱法(HighperformanceLiquidChromatography,HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱法(HighPressureLiquidChromatography,HPLC)。HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等,现代HPLC仪还有微机控制系统,进行自动化仪器控制和数据处理。制备型HPLC仪还备有自动馏分收集装置。2、、、仪器高效液相色谱仪(Agilent1260),色谱柱:C18柱(250mm×,);平头进样器。、试剂乙腈(色谱纯),冰乙酸,维生素C,磷酸二氢钾等均为分析纯,实验用水为超纯水。Vc标准溶液:,用1mol/L乙酸溶液溶解,定量转移至250mL容量瓶中,用1mol/L乙酸溶液定容,得到100mg/L标准溶液备用,现用现配。、色谱条件流动相:3%的乙腈-(v/v);流速1mL/min;柱温30℃,紫外检测波长265nm;进样量10μL。、、样品处理1、按操作说明开启液相色谱仪,设定方法参数。2、样品准备:取10片维生素C片,研匀。,用1mol/L乙酸溶液溶解,定量转移至50mL容量瓶中,用1mol/L乙酸溶液定容,。3、标准曲线绘制:分别配制5,20,50,80,100mg/L的Vc样品溶液,待液相色谱稳定后进样分析,平行测定3次。以Vc色谱峰面积对浓度作图,绘制标准曲线。4、定量分析:。平行测定2次,记录其Vc的色谱峰面积,根据校准曲