文档介绍：大肠杆菌电转化感受态细胞制备第一天:(如XL1-Blue,DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°(250-500ml)(),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用第二天:-1ml过夜培养物至装有500mlLB(或其他营养丰富的培养基)的1-°C下剧烈振荡培养2-(培养1小时后每半小时测定一次)-,从摇床中取出摇瓶,置于冰上冷却至少15分钟(需要的话这种方式可以存放培养液数小时)°C5000g下离心15分钟,弃上清液(如需要,沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天)。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中(几毫升),然后加水稀释至离心管的2/3体积。,,、冰冷后的10%,小心弃去上清液(沉淀可能会很松散)%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-,于-80°C保存转化方法:-10μlDNA,-3μlDNA,(无泡),(200欧姆,25μFd,)(检查时间常数,应该在3以上)° 感受态细胞的制备和转化【实验目的】1、了解感受态细胞制备与转化的原理2、掌握感受态细胞制备与转化的操作步骤3、获得转化有质粒pGEX-NS53的转化菌株【实验原理】转化作用是在一定条件下,一种特定的DNA分子(供体或称转化因子)转入到一定的细菌体内(受体菌),使其发生遗传形状改变的过程。在正常生长条件下,少数细菌可发生转化作用,但大多数细菌并不发生转化,只有在一定条件作用下(如用Ca++处理细菌细胞或电刺激),细菌呈现感受状态后,外源DNA才能转化进入受菌体内。因此,若想将外源DNA分子转化进入一定的受菌体内,通常需将受体菌先制备成易感受状态。感受态通常指的是细菌具备吸收转化因子的一种生理状态。产生感受态细胞的理论机制目前除有一些假说外,并无统一的结论。一般说来,细菌细胞在对数生长的早中期,经处理后,有一定的转化能力,但在它们进入静止生长期以后,就逐渐丧失。因此进行细菌细胞转化时,掌握合适的细菌培养时机是很重要的。本实验所用的供体DNA分子为一个重组质粒,它是将人庚型肝炎病毒(HGV)NS5区的一段长度为881bp的cDNA片段(NS53)插入到表达载体pGEX-5X-1中,位于编码日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(GST)的下游,并与GST处于同一阅读框。因此在受体菌体内将表达出GST-NS53融合蛋白。实验中所用的受体菌为大肠杆菌BL21(DE3)选择此菌株是因为可用乳糖替代IPTG作为目的基