文档介绍：中国修复重建外科杂志2012年2月第26卷第2期·177·
NEP1-40 基因慢病毒载体构建及鉴定
袁海峰 1,2 宋跃明 1 刘浩 1 周春光 1 孔清泉 1 刘立岷 1 龚全 1
【摘要】目的构建 NEP1-40(Nogo extra cellular peptide residues 1-40)基因慢病毒表达载体,为后续转染目
的细胞奠定基础,并实现在细胞中高效、稳定表达。方法从含有 NEP1-40 基因的 cDNA 文库中,利用 PCR 方法钓取
NEP1-40 基因编码区片段。将目的基因与酶切线性化的载体 pGC-FU 进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞。对长
出的克隆先进行菌落 PCR 鉴定,再对 PCR 鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,比对正确的克隆即为构建成功的目的质
粒。将构建成功的目的质粒和两种辅助包装质粒共转染 293T 细胞,包装成慢病毒,荧光显微镜下观察慢病毒转染 293T
细胞后荧光表达情况,采用 Western blot 检测 NEP1-40 及绿色荧光蛋白融合蛋白表达情况。结果 PCR 产物经电泳分
析表明成功获取 NEP1-40 基因 cDNA 克隆,测序提示慢病毒转染质粒连接构建正确;荧光表达检测显示 293T 细胞中产
生慢病毒颗粒;Western blot 显示 NEP1-40 在细胞内稳定表达。结论成功构建 NEP1-40 基因慢病毒表达载体,为后续
转染目的细胞后从分子水平探讨 NEP1-40 基因功能奠定了实验基础。
【关键词】 NEP1-40 神经再生慢病毒载体 293T 细胞
CONSTRUCTION AND IDENTIFICATION OF Nogo EXTRA CELLULAR PEPTIDE RESIDUES 1-40 GENE
1, 2 1 1 1 1 1
LENTIVIRAL VECTOR/YUAN Haifeng , SONG Yueming , LIU Hao , ZHOU Chunguang , KONG Qingquan , LIU Liming ,
GONG Quan1. 1Department of Orthopedics, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu Sichuan, 610041, ;
2Department of Spinal Surgery, Affiliated General Hospital, Ningxia Medical University. Corresponding author: SONG Yueming,
E-mail: sym_cd@
【 Abstract】 Objective To construct a lentiviral expression vector carrying Nogo extra cellular peptide residues 1-40
(NEP1-40) and to obtain NEP1-40 efficient and stable expression in mammalian cells.