组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A联合细胞因子体外诱导胚胎干细胞分化为肝细胞的研究.doc

文档介绍：
组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素 A 联合
细胞因子体外诱导胚胎干细胞分化为肝细
胞的研究#
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朱晓波1,2,张冬梅2,张谦3,张洁2,周鸣鸣3**
(1. 如皋人民医院儿科,江苏如皋 226000;
2. 江苏省南通大学医学院,江苏南通 226019;
3. 江苏省南通大学生命科学学院,江苏南通 226007)
摘要:建立细胞因子和曲古菌素 A 联合诱导小鼠 ES 细胞向肝细胞分化的 3 步法。ES 细胞
在含激活素 A 的不含白血病抑制因子的培液中培养 3 天分化为定形内胚层细胞;然后加入
酸性成纤维细胞生长因子和 TSA 联合诱导 5 天,再加入 HGF 等诱导因子培养 5 天,向肝细
胞方向分化,最后以致瘤素 M、地塞米松继续培养 5 天形成成熟肝细胞。自发分化组做阴
性对照组不加上述因子,不含 LIF 的培养液进行自发分化培养。诱导分化 18 天后,用光镜,
免疫荧光、RT-PCR 检测。结果显示诱导 18 天后,出现了大量类肝脏细胞表型的上皮细胞,
RT-PCR 检测显示这些细胞表达成体肝脏细胞特异标记如酪氨酸转氨酶、白蛋白、天冬氨酸
转氨酶、甲状腺激素结合蛋白等。细胞免疫荧光也显示为甲胎蛋白、白蛋白、细胞角蛋白
18 阳性,分化细胞具有成熟肝脏细胞所具有的糖原储存、吲哚菁绿摄取和释放功能。其分
化效率用白蛋白阳性率表示,诱导分化率可达 %,为肝细胞来源提供了新的方法。
关键词:胚胎干细胞; 肝样细胞; 诱导分化
中图分类号:
Differentiation of embryonic stem cells into hepatocytes
induced by bination of cytokines and Trichostatin A
Zhu Xiaobo1,2, ZHANG Dongmei2, ZHANG Qian3, ZHANG Jie2, ZHOU Mingming3
(1. Rugao Renmin Hospital,department of paediatrics , Nantong 226000;
2. Medicine school, Nantong University, Nantong 226019;
3. Life Science shool, Nantong University, Nantong 226007)
Abstract: In this paper , we presented a novel 3-step procedure to efficiently direct the
differentiation of mouse ESCs into hepatocytes induced bination of cytokines and sodium
butyrate. Mouse ESCs were first differentiated into definitive endoderm cells by 3 days of Activin
A treatment; next, presence of acid fibroblast growth fa