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腥痉窝卓死撞泥低@耐药株基因研究·实验研究与卫生检验检测·.潞餴疭刘健龙,李先斌,康艳,郭宽鹏,宋春荣猯琔控菌株:大肠埃希菌⒎窝卓死撞鶤四摘要:目的了解湖南地区新生儿感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因基因的流行情况。方采用ǘ攴窝卓死撞衟蚣觳猓捎梅ü锩防锇9旧腣籆全自动细菌鉴定检测种抗菌药物的体外抗菌活性,┰霾锞炕蟛庑虿⒔行蛄蟹治觥结果基因在所有耐药株中均有第、位氨基酸的改变。结论本省腥痉窝卓死撞旧褰榈监低@嗄鸵┗基因突变情况十分普遍,监测其突变频率、位点对指导临床用药及耐药机制研究十分重要。关键词:肺炎克雷伯菌;喹诺酮类;⋯,即染色体介导的耐药机制,国内尚缺乏肺炎克雷伯菌蛳低逞芯勘ǖ馈NA私夂系厍律感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因基因的流行情况,遂对株分离自颊卟一内酰胺酶的辛藀蚣觳猓纸ń峁ǖ廊缦隆牧嫌敕椒菌株来源株7掷胱—月本院新生儿患者临床标本,分别为痰液份、尿液荨⒋蟊份。细菌鉴定及抗菌药物敏感性试验采用法国生物梅里埃公司生产的远妇ㄏ低骋约鉴定卡和狦┟舴治隹āV铜绿假单胞菌鹤晕郎苛俅布煅橹行摹细菌处理挑过夜纯培养细菌单一菌落置入發缓冲液,婕尤痳胄锨逡杭为基因检测的模板液,一℃冰箱保存备用。基因检测均为ǎ谢蛞镄蛄泻湍康牟锍度见表8髦职谢騊扩增体系均为:每反应体系引物疞/./,/,倍缓冲液肚/:/琈/琓/琋痸,不计体积水.,模板液梗芊从μ寤。┰鋈妊凡数为:℃,出现与分子相当的目的条带为阳性。检测试剂盒和由嘉美诺斯生命科学有限公司提供。实用预防医学年碌淼期文章编号:———法中图分类号:.文献标识码:痡,.—“,.—.;;基金项目:湖南省科技厅一般科技计划作者单位:湖南省儿童医院铣ど作者简介:刘健龙,男,硕士,主管检验师,主要从事临床微生物工作。表谢騊引物序列,琕—琄『琫,.;.;—.,;;%,,..:趘
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构酶Ⅵ由划虮嗦耄叭说难芯恳阎な礸蚿峁药敏试验结果株分离自儿童患者的钥咕物的药敏试验结果见表基因;的安庑蚪峁菹妇曰繁承呛左氧氟沙星的药物敏感性,选取株耐药株,┰鰌换因的耐药决定区,获得产物经纯化后直接测序,结果见图⑼换虮榷酝槐浣峁。致喹诺酮类药物是通过阻断细菌染色体遗传物质的复制与转录过程而达到杀菌目的。在许多的耐药机制中,其本身的基因突变占据非常重要的地位,当然还有其他的一些机制如外膜蛋白通透性的改变,还有由耐药质粒介导的一些机制在喹诺酮类耐药机制占很大的比重,它们之间可独立或相互协同以增加细菌的耐药水平。但天然的或基因突变造成的耐药是阴性杆菌对喹诺酮类抗菌药物产生耐药的主要机制,在基因突变耐药机制中,喹诺酮类对肺炎克雷伯菌的有两个主要靶位点:旋转酶和拓扑异构酶Ⅵ,当细菌靶位发生改变时,会直接影响到抗菌药物的效果。C赣蒰疊基因编码;拓扑异因氨基酸改变对细菌耐喹诺酮类药物相关性较小【,在本研究中利用椒ǚ治龆脏低@嗄鸵┑姆窝卓死撞衟基因是否有突变,只有发生变异时,肺炎克雷伯菌才会明显表现出对喹诺酮类耐药。为了探讨肺炎克雷伯菌基因的突变以及疋氨基酸改变与喹诺酮类耐药的相关性,从统计本院检出的情况来说,肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物耐药比较常见,所以本研究抽取株由一远妇ㄏ低臣ㄎ6几种喹诺酮类药物耐药的肺炎克雷伯菌,