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大鼠肝脏过氧化氢酶的分离纯化及性质优蚴11222值及值进行了测定。加入啪~的磷酸缓冲液将沉淀溶解,;颖币娇拼笱萄惺遥颖保易过氧化氢酶是一种广泛存在于需氧4个具有相同多肽链的亚基组成⋯,生物学功能是催化细胞内篛:分解,防止过多篛:对细胞的危J业、食品与乳制品业、纸浆和造纸业以及农业环保产JHJJMJ人胎盘等中分离纯化过氧化氢酶方法的报道,但不同程度上存在制备效率不理想、成本昂贵、技术要求高等问题。本研究首次采用大鼠肝脏为原料,建立了一套操作简单、成本低,适合一般实验室分离纯化过氧化氢酶的方法,并对产物的最适温度、最适实验器材实验材料雄性大鼠,由河北医科大学实验动物中心提供。所用化学试剂均为国产分析纯。主要仪器ZOPR52D()DYY6B()uV9100(司一型精密酸度计虾@状。,≡冉min05l辉冉℃,一离心后保留上清液备用。212006O5·坏牧蛩崮迫芤海〗涟离心min,保留上清备用。213412透析液:%乙醇,醋酸缓冲液,toolL1)46000rrain10min淀,溶于toolLpH78除去不溶物,得到大鼠肝脏过氧化氢酶溶液。制备过程中各阶段产物用比色测定法测定酶活,分析制备效率。分离纯化产物酶活性回收率用各步产物的酶活占匀浆上清液酶活的百分比来表示。电泳分析12SDS分离蛋白,用考马斯亮兰显色,观察各阶段产物的纯度变化,分析纯化效果,并鉴定纯化产物的大小。蛋白印迹检测12SDSPAGE后转膜,进行免疫印迹分析,以兔抗大鼠过氧化氢酶抗体为第一抗体,辣根过氧化物酶标记山羊抗兔子IgG摘要:根据过氧化氢酶的催化特性,采用盐析,透析,离心等技术,从大鼠肝脏中分离纯化过氧化氢酶,提纯倍数达到倍,酶活性回收率为%。为一般实验室分离纯化大鼠过氧化氢酶提供了一种有效的方法。酶学性质研究表明,该酶最适温度为℃,最适值为,在此条件下,以过氧化氢为底物的值为关键词:大鼠肝脏;过氧化氢酶;纯化;酶学性质Q8141A文章编号:———℃,44000氨基酸和生物资源,收穑日期:——作者简介:周娜磊。女,在读本硕生·通讯作者篿∞.(06020403·/mmolL
万方数据
计算出酶的活力。在制备效率分析、酶最适温度和浓度高锰酸钾滴定剩余的篛:,换算出减少的值为。最适温度、最适值下以篛:为底物,酶催化宦纫一萘酚产生紫色沉淀物,间接的测定与一抗反应的过氧化氢酶。蛋白含量测定以牛血清白蛋白做为标准,用ā测定蛋白浓度。ú舛ǚā阂訦:为底物,用过氧化氢1min同时,钼酸铵与剩余的:生成淡黄色络合物,该405处有特征吸收峰,吸收值大小与剩余:的量相关,间接得到减少的:的量,进而最适测定中采用此法测定酶活力。.味ǚň蒍:以:为底物,用过氧化氢酶催lminHOKin采用此法测定酶活力。1:减少所需的过氧化氢酶的量作为一个酶(u)的酶活性单位数表示。最适温度与最适值的测定pH75l(102537C50C6070)定酶活力,获取大鼠肝脏过氧化氢酶的最适温度。将纯化的酶产物原液用浓度为一的不同值磷酸缓冲液.....090100)37比色法测定酶活力,获取大鼠肝脏过氧化氢酶的最适值。值测定分别以mmolL篛:作为底物,最适温度、最适值条件下,用滴定法测定酶活力,使用—