文档介绍：第三章外植体的选择和灭菌主要内容第一节外植体的选择第二节外植体的灭菌方法第三节污染原因和预防措施第一节外植体的选择植物组织培养的主要作业大致包括:外植体的选择、培养基的制备、器具的消毒、无菌操作和环境条件的调控。一、选择优良的种质无论是离体培养繁殖种苗,或者是进行生物技术研究,培养材料的选择都要从主要的植物入手,选取性状优良的种质,或特殊的基因型。对材料的选择要有明确的目的,具有一定的代表性,提高成功机率,增加其实用价值。二、选择健壮的植株组织培养用的材料,最好从生长健壮的无病虫的植株上,选取发育正常的器官或组织。因为这些器官或组织代谢旺盛,再生能力强,比较容易培养成功。三、选择最适的时期组织培养选择材料时,要注意植物的生长季节和植物的生长发育阶段。如快速繁殖时应在植株生长的最适时期取材,这样不仅成活率高,而且生长速度快,增殖率高;花药培养应在花粉发育到单核期时取材,这时比较容易形成愈伤组织。四、选取适宜的大小建立无菌材料时,取材的大小根据不同植物材料而异。材料太大易污染,也不需要;材料太小,多形成愈伤组织,甚至难于成活。一般选取培养材料的大小,--。如果是胚胎培养或脱毒培养的材料,则应更小。第二节外植体的灭菌方法一、常用灭菌药剂的使用和效果灭菌剂使用浓度(%)清除的难易消毒时间效果次***酸钠9—10易5—30很好次***酸钙2易5—30很好漂白粉饱和浓度易5—30很好***化***—1较难2—10最好酒精70——2好过氧化氢10—12最易5—15好溴水1—2易2—10很好***银1较难5—30好抗菌素4—50mg/L中30—60较好二、外植体的灭菌方法外植体在接种前先要灭菌,在灭菌前,又先要进行预处理。植物材料一般采取的预处理方法是,先对植物组织进行修整,去掉不需要的部分,将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。经过预处理的植物材料,其表面仍有很多细菌和真菌,因此还需进一步灭菌。常规的表面灭菌处理方法①把材料放进70%的酒精中约30s。②%的升***(HgCl2)中浸泡10min。或用10%的漂白粉上清液中浸10min~15min。③无菌蒸馏水冲洗3~5次。④灭菌时进行搅动,使植物材料与灭菌剂有良好的接触。⑤%的Tween20(吐温)或Tween80湿润剂,则灭菌效果更好。第三节污染原因和预防措施一、污染的原因污染——是指在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌,导致培养失败的现象。污染的原因:从病源菌方面来分析主要有细菌及真菌两大类;从污染的途径而言,主要是由于外植体带菌、培养基及器皿灭菌不彻底、操作人员未遵守操作规程等引起的。