文档介绍：Westernblot免疫印迹标准流程仪器:高压锅、玻璃匀浆器、高速离心机、分光光度仪、—20℃低温冰箱、垂直板电泳转移装置、恒温水浴摇床、多用脱色摇床。试剂:单去污剂裂解液、()、10%分离胶、4%浓缩校、G250考马斯亮蓝溶液、、2X(5X)SDS上样缓冲液、电泳缓冲液、转移缓冲液、10X丽春红染液、封闭液、TBST、TBS、洗脱抗体缓冲液、显影液、定影液、抗体、化学发光试剂。杂品与耗材:各种规格的吸头、离心管和加样器;各种规格的烧杯、量筒和平皿等玻璃器材;硝酸纤维素膜,乳胶手套,保鲜膜,搪瓷盘(>20×20cm),X-光片夹,X-光片,玻棒长短各一根,计时器,吸水纸,试剂配制:(一)·HClTris(),用浓盐酸调pH至所需点(见下所示),最后用蒸馏水定容至100ml,高温灭菌后室温下保存。(10mmol/L),,-20℃保存。()12g蒸馏水至500ml溶解后,高压灭菌,室温保存。·12H2O(),高压灭菌,室温保存。10%SDSSDS10g蒸馏水至100ml50℃水浴下溶解,室温保存。如在长期保存中出现沉淀,水浴溶化后,仍可使用。10%过硫酸胺(AP),4℃保存,保存时间为1周。1MTris/HCL()(分离胶用,HCL调pH值),,最后用超纯水定容至100ml,高温灭菌后室温下保存。1MTris/HCL()(浓缩胶用),,最后用超纯水定容至100ml,高温灭菌后室温下保存。30%Acr/Bic(29:1)Acr29gBic1g双蒸水100ml37℃下溶解后,4℃保存。使用时恢复至室温且无沉淀。20%Tween20Tween2020ml蒸馏水至100ml混匀后4℃保存。(二)使用液G250考马斯亮蓝溶液(测蛋白含量专用)(现在多用BCA定量试剂盒代替)考马斯亮蓝G250:100mg95%乙醇:50ml磷酸:100ml蒸馏水至1000ml配制时,先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料,再加入磷酸和水,混匀后,用滤纸过滤,4℃保存。(),室温保存。100mg/ml牛血清白蛋白(BSA),-20℃保存。制作蛋白标准曲线时,,-20℃保存。SDS-PAGE凝胶电泳10%分离胶和4%浓缩胶(一块胶)10%分离胶(5ml)5%浓缩胶(2ml)(ml)(ml)30%Acrylamide(29:1).