提取脂质的几种方法.doc

文档介绍：Folch法提取脂质组织称重。剪碎组织,按照1g组织加入20ml溶剂比例加入氯仿和甲醇(2:1)混合溶液。混匀15-20min后1500-2000r/min离心5min收集溶液。(20ml溶液加4ml水)%NaCl溶液清洗,涡旋几秒钟,以2000rpm离心10min得到两相液面。吸取上清液,用于分析检测神经节苷脂类或小的极性分子。如果有必要(为移除标记分子),用甲醇和水(1:1)清洗两相液交界面1至2次,注意不要冲洗到下层液体内。收集的下层液即氯仿层含有脂质,用N2吹干氯仿即得脂质。文献采用正相液相色谱法和大气压化学电离质谱分析测定神经酰胺时说按Folch法,以氯仿和甲醇(2:1,1:1,1:2)三个不同比例来提取脂质,每种混合溶液提取2小时。Bligh和Dyer的方法(也是我们之前用的方法)皮肤组织称重,胰酶37℃消化1h,用镊子分离表皮和真皮,弃去真皮。剪碎表皮组织,(1:2)混合溶液。匀浆15min。,混匀30s。,混匀30s。1500r/min离心15min,吸取下层氯仿层,收集在棕色小瓶中,N2挥干溶剂,即得总脂质。注:本次试验Forch法取两只正常组的雌雄鼠制备两个样,B&D法也是取两只正常组的雌雄鼠制备两个样。预先准备好需要的溶剂、移液管、棕色小瓶和离心管(离心管最好用玻璃的)。