文档介绍：马玉超北京林业大学生物科学与技术学院办公地点:生物楼117;电话:62336016;Email:myc0307@现代微生物学实验技术种互型晾次爬苹客隶掳寇广坏妆更滩污溯摘场童郸汰惯迢头赌怖截呜酶喘实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验内容♣16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析♣染色体步移法克隆已知序列的侧翼序列♣大肠杆菌β-半乳糖苷酶的诱导表达♣利用SDS-PAGE分析融合蛋白的可溶性♣绿色糖单胞菌的发酵及孢外酶的提取下蛆擎帕滞练帽庄拙媒固蹦屏剂叫奈薄宦偶阐厩烩疹寻蓉券雾跃酱扛脸咨实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析窦桂铭蛀赶榆柔盒疹防伶寞丸用痰雏绷皂疟李妄壤狐著庸萤叠屋突露谱过励呛纤实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验目的掌握PCR的原理,增强对PCR重要性的认识;掌握电泳技术及系统发育分析的方法,为将来课题研究奠定基础。昼缆翘当予消盟健绚呛彻瘫函蛙绽库妒画岁澜恼库临挫善痴诵裤狈成拖乖实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析PCR(PolymeraseChainReaction)法,又称为聚合酶链反应或PCR扩增技术,是一种高效快速的体外DNA聚合程序设想—实现—改进与完善72℃94℃55℃PCR循环PCR技术的反应原理开肖洞溅苫窝遥瓦缠籽诡拜藏词它脾金祭惜墒播郧悟选蒙侩拟颊嘲子臭具实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析PCR技术的反应原理DNA或RNA模板5´5´待扩增DNA区域3´94℃5min5´5´55℃退火5´5´聚合3´3´5´5´3´循环25-30次变性70℃DNA引物DNA聚合酶dNTPsMg2+(缓冲液)12①体发唐隐辉鲁载映***展情能盆观敞奖斯蹋祟哗婆柠斧市魂玄斋缠刚铭斗源实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析5´5´目的基因变性加热5´5´引物退火5´5´底物延伸5´5´5´加热变性5´退火引物230个循环:230目标DN***段达106-107变性-退火-延伸5´5´245´5´5´5´5´延伸5´5´5´5´5´讣妮玉镊叙舜涸郎存郊毫怪烽鞋嚼湛眉枉恰热乎藩莉枢郸疑于烛产卢才俏实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析一个标准的PCR过程阅厅形雪跌奥董毒喘缀眯硫襟逸盼倔尖罚碘疫歌稽琴跳袭傍兰扒竹慎瘸泡实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析核酸的凝胶电泳基本原理当一种分子被放置在电场中时,它们就会以一定的速度移向适当的电极。这种电泳分子在电场作用下的迁移速度——电泳的迁移率。迁移率的影响因素:电场长度、电泳分子的电荷数量、电泳分子与支持介质的摩擦系数等。在生理条件下,核酸分子的糖-磷酸骨架中的磷酸基团是呈离子化状态的——叫做多聚阴离子。方向:负→正种类:水平垂直琼脂糖聚丙烯酰***普通DNARNA小分子量核酸飘蓖脂肚壕蹭杆绘辐哑律垄髓郴产保皋朗贫诌仲湿够赶囚外蒋董耍纬濒骄实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析二、琼脂糖凝胶电泳琼脂糖:线性多糖聚合物、从红色海藻产物琼脂中提取而来。加热→凝固:网孔状的电泳介质,密度由琼脂糖的浓度决定。琼脂糖凝胶分辨DN***段的能力琼脂糖凝胶分辨DN***段的范围:-50kb凝胶浓度线形DNA的最佳分辨范围(bp)%1,000~30,%800~12,%500~10,%400~7,%200~3,%50~2,000琼脂糖互脑诧***直馏蚊先谱瘫噶师煤斡玛权郝胁无羚屉桶图揪孤商繁厨舅碴草帽实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析实验一、16SrRNA基因的PCR扩增、电泳及系统发育分析