文档介绍：猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究
唐先春1, 吴斌1*, 索绪峰2, 王大林2 ,陈焕春1, 尹争艳1
(, 武汉 430070)
(, 海南 571133)
摘要: 用PCR方法配合生化鉴定,从有肺炎症状猪的肺脏及进行性萎缩性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis, PAR)症状猪的鼻拭子中分离出66株多杀性巴氏杆菌(Pasteurela multocida, Pm)。然后做了药敏试验,并用PCR方法对这66株Pm进行分型及毒素基因的检测, 用豚鼠皮肤坏死试验及小鼠致死试验对产毒素多杀性巴氏杆菌(Toxigenic Pasteurella multocida, T+Pm)进一步鉴定。结果显示PCR鉴定与生化鉴定Pm结果完全一致;PCR分型表明有46株为D型Pm,18株为A型Pm,1株为B型Pm,1株无法定型;有8株用PCR检测为T+Pm;豚鼠皮肤坏死试验及小鼠致死试验对这8株T+Pm的进一步鉴定,也表明均为产毒素菌株。所鉴定的8株T+Pm都为D型,都分离于有严重PAR症状的猪。
关键词: 多杀性巴氏杆菌; 产毒多杀性巴氏杆菌;PCR;分型;药敏试验
中图分类号: +2 文献标识码: A 文章编号: 0366-6964(2005)0
多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida, Pm)是一种重要的病原,可以导致猪肺疫、牛羊出败、禽霍乱等危害严重的畜禽传染病。产毒多杀性巴氏杆菌(Toxigenic Pasteurella multocida, T+Pm)是猪进行性萎缩性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis, PAR)的主要病原菌。该病是养猪业的一种重要传染病,其主要表现为:慢性鼻炎、颜面部变形、鼻甲骨萎缩或由于经常打喷嚏而造成鼻出血。哺乳仔猪感染本病后,除引起鼻甲骨甚至鼻腔变形、萎缩或消失外,还可以引起全身钙代谢障碍,致使仔猪发育迟缓、饲料利用率降低,有时伴发急、慢性支气管炎,导致仔猪死亡。育肥猪感染本病后,呼吸道的正常结构和功能遭到损害,致使机体抵抗力降低,极易感染其它病原,诸如支原体、胸膜肺炎放线杆菌、副嗜血杆菌、猪流感病毒、猪生殖—呼吸道综合征病毒等,引起猪呼吸道综合征,增加猪的死亡率[1~4]。
多杀性巴氏杆菌按荚膜的不同可分为A、B、D、E、F 5个血清型。研究表明,T+Pm主要是D型Pm,而且T+Pm主要分离于具有严重PAR症状的猪,从有肺炎症状猪分离的Pm一般是不产毒素的[5, 6]。
T+Pm与T-Pm在形态特征及生化反应特性上没有区别。与PAR密切相关的T+Pm产生一种约145kDa的皮肤坏死毒素(Dermonecrotic toxin, DNT),该毒素由toxA基因编码。一般认为T-Pm不会导致PAR,而提纯的DNT可以导致PAR的发生[7~9]。所以,DNT是诊断及控制PAR的关键,也是区分T+Pm与T-Pm的关键。
基于DNT的特性,已经建立了一些检测方法,以区分T+Pm与T-Pm,如豚鼠皮肤坏死试验、小鼠致死试验[10]、细胞促生长试验、胎牛肺细胞毒性试验[11]、ELISA[5]。但这些毒素检测方法,无论是动物试验还是细胞培养,操作繁琐,费时费力,