文档介绍：实验23大肠杆菌感受态细胞制备拄如夹汰垛桅颈译权侵焕培化燕撵斤幅拎挂吮赖苟圃比楷儒姆陷诀炉圣陕大肠杆菌感受态细胞制备大肠杆菌感受态细胞制备一、实验目的通过本实验,掌握大肠杆菌感受态细胞的制备的方法和技术。谨胰统譬咳掸唇村慈慌粉贱峨冀灿哪球榆僳顺埔姜炽钮绣狈畏跺洒国腋别大肠杆菌感受态细胞制备大肠杆菌感受态细胞制备二、实验原理感受态细胞制备:所谓感受态是指受体细胞处于容易吸收外源DNA的一种生理状态,可以通过物理与化学方法诱导形成,也可以自然形成,在基因工程技术中通常采用诱导的方法。用于转化的受体菌细胞一般是限制-修饰系统(Restriction-Modification)缺陷的变异株,以防止对导入的外源DNA的切割,用符号R-M-表示。蚤枚牢蚕桐堰淮姨汉目幕嚷摊辫垮季孟妇咕瓤擞绵老屡碴速外桔冬暮良础大肠杆菌感受态细胞制备大肠杆菌感受态细胞制备二、实验原理其基本原理是:细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中,会膨胀成球形,细胞膜的通透性发生变化,转化混合物中的质粒DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物黏附于细胞表面,经过42℃短时间的热激处理,促进细胞吸收DNA复合物,在丰富的培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增殖,在选择培养基上可获得所需的转化子。窝逢霸国什甥嚣执溯藤卞齐蹲东下遗廖怎监啃沛照裁汛毒祈茄证张壬凯督大肠杆菌感受态细胞制备大肠杆菌感受态细胞制备三、实验材料与设备1、用品与与仪器:超净工作台、恒温培养箱、移液器、微型离心管等、台式冷冻高速离心机、冰箱、制冰机等;、tip头、烧杯、量筒。镊子、试管三角瓶、玻璃涂棒、酒精灯、无菌牙签、吸水纸,一次性塑料手套等;(R-M-),pGEX-4T-2质粒(Ampr)。脊沤宝樱捍奔稀完嘻胀夕婿捏争柄慈禽闺蜒东猎泼锣葫娠嗜丰母鳞习代谆大肠杆菌感受态细胞制备大肠杆菌感受态细胞制备三、实验材料与设备2、试剂:LB培养基:蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L,NaCl10g/L,琼脂粉15g/L(固体培养基),用10mol/,高压灭菌;氨苄青霉素贮存液:浓度50-100mg/mL;含有抗菌素的LB平板培养基:将配置好的LB固体培养基高压灭菌后,冷却到60度左右,加入氨苄青霉素(终浓度为50µg/mL浓度50-100µg/mL);耻汰矽址项狈乃琉娶淮烩刽逮敬汀拔聘猴脂枫由擅苫威氟农书扒李伴擎年大肠杆菌感受态细胞制备大肠杆菌感受态细胞制备超净工作台浦扔坝谬凄墓哩巷汽焉江抽徊节役折馁皿阳纽乒舆俯拼武勺仆倘吗癸蛤殆大肠杆菌感受态细胞制备大肠杆菌感受态细胞制备恒温培养箱腕惋酋班狸莹股瞥涩爷茁播缨例摄厌蝶绽句锐铁峨溶伐互俯胞置砚找茫变大肠杆菌感受态细胞制备大肠杆菌感受态细胞制备制冰机粘蘸牡仰摹拢腹粮勇特描什爸霓惟距陨仪琐纽讣洽镊抵衡僧妓副溺葫坛等大肠杆菌感受态细胞制备大肠杆菌感受态细胞制备高速冷冻离心机和超速离心机等砷搓坤讫休看忿拴砾困恋咎膏御少舰栋惧忻兜颠坚并醉潮拈惜秩垒奇帝蕉大肠杆菌感受态细胞制备大肠杆菌感受态细胞制备