文档介绍：大肠杆菌感受态细胞的制备
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分类：细胞技术 > 感受态细胞
来源：
实验管理实验概要
大肠杆菌感受态细胞的 CaCl2 法制备及质粒转化
实验原理
处于对数生长期的细菌经 CaCl2 处理后接受外源 DNA 的能力显著增加。细菌处于容易吸收外源 DNA 的状态叫感受态。
在自然条件下，很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内，但在人工构建的质粒载体中，一般缺乏此种转移所必需的 mob 基因，因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态，摄取外源 DNA 。

以
转化（ Transformation ）是将外源 DNA 分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种
手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。
转化过程所用的
受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体
（R-,M- ），它可以容忍外源
DNA 分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些
特殊方法（如电击法， CaCl2
，RbCl(KCl) 等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生
了暂时性的改变，成为能允许外源
DNA 分子进入的感受态细胞（ Compenent cells ）。进入
受体细胞的 DNA 分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，
使受体细胞出现新的遗传性状。
将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子（
Transformant ，即带有异
源 DNA 分子的受体细胞）。目前常用的感受态细胞制备方法有
CaCl2 和 RbCl(KCl) 法，
RbCl(KCl) 法制备的感受态细胞转化效率较高，但
CaCl2 法简便易行，且其转化效率完全可
以满足一般实验的要求，制备出的感受态细胞暂时不用时，
可加入占总体积
15%的无菌甘油
于-70 ℃保存（半年），因此
CaCl2 法使用更广泛。
主要试剂
(1) CaCl2 溶液
(2)LB 液体培养基
(3)30% 甘油： 30mL 甘油溶于 100mL 蒸馏水，高压灭菌。
主要设备
超净工作台
冷冻离心机
恒温摇床
－ 70 ℃冰箱
(5)10mL 移液管
吸耳球
(7)1mL 、200 μL移液枪（配套枪头）
(8)50mL 离心管
(9) 离心管
实验材料
大肠杆菌 DH5α （R- ， M- ， Amp- ）
实验步骤
（一）受体菌的培养
(1) 从

LB

平板上挑取新活化的

E. coli DH5

α菌落，接种于单

3～ 5mL LB

液体培养基中， 37 ℃
下振荡培养过夜（

12h 左右）。
(2) 将该菌种悬液以