文档介绍：《现代免疫学年第卷第期
基于抗原表位的抗蛋白质抗体制备新方法
周游,吴峰,范国才,吴祖泽,王清明
蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京
摘要:为建立一种基于抗原表位的抗蛋白质抗体制备新方法。以噬菌体作为展示载体,在其表面展示蛋白质的抗原表
位肽,提取重组噬菌体作为免疫原免疫动物,通过、和细胞免疫荧光技术检测抗体的滴度及特异性。
结果表明,以展示蛋白质抗原表位的噬菌体免疫动物,得到的抗体能特异识别相应的表位肽,其中针对—抗原表
位的抗体,还能特异识别蛋白。结论是,表面展示小肽的噬菌体具有很好的免疫原性,如果展示的小肽确为蛋
白质抗原表位,则可作为完整蛋白质抗原的替代抗原免疫动物来制备识别完整蛋白的抗体。
关键词:表位肽;噬菌体展示;抗体
中图分类号: 文献标识码: 文章编号: 卜——
抗体对于蛋白质研究至关重要,因为它们可以菌体快速制备。
与蛋白特异性结合,从而使研究人员能够在体外或丝状噬菌体是采用较多的展示系统。有人将一
体内对蛋白质进行鉴定和功能研究。随着蛋白质组淀粉样蛋白的表位展示在丝状噬菌体表面,免疫老
学的迅猛发展,迫切需要大量抗体来满足高通量蛋年性痴呆转基因模型小鼠,可明显减少小鼠脑内老
白质组学研究的需求。传统的抗体制备方法一般是年斑的形成,而优化的免疫表位具有更明显的治
用完整蛋白抗原或合成肽免疫动物,但完整蛋白不疗效果;用表面展示有呼吸道合胞病毒或单纯疱
易得到,纯化过程耗时、费力,而通过化学合成法疹病毒小肽的丝状噬菌体在小鼠体内可诱导产生保
合成抗原肽成本较高,并且还需要与载体蛋白偶联护性免疫反应口; 表面展示或
后才能用于动物免疫,因此,对于高通量的抗体制肽的丝状噬菌体在体内和体外能诱发
备而言,抗原的获得是其中关键的限速步骤。特异性反应,其中,表面展示小
噬菌体展示技术是近年来分子生物学研究领域肽的噬菌体颗粒免疫转基因小鼠可抑制肿瘤生
的一项新兴技术。噬菌体展示技术能在不影响噬菌长。这些研究表明,丝状噬菌体是一类很好的展
体本身侵染能力的前提下,将外源基因编码的蛋示外源蛋白表位的展示系统,且在体内具有很好的
白以融合蛋白的形式展示在噬菌体外壳上,能保持免疫原性。但丝状噬菌体是温和性噬菌体,生长速
外源蛋白的天然三维构象,并表现其生物学功能和度慢,作为一种用于高通量的展示系统,噬菌
免疫原性。噬菌体展示技术已被广泛应用于外体则更具优势。噬菌体是烈性噬菌体,扩增速
源多肽的展示,但对于噬菌体展示多肽的免疫原性度快,可以在数小时内得到大量的噬菌体,且其展
研究还不多见。噬菌体作为一种颗粒性抗原,属于示的外源小肽位于外壳蛋白质的末端。
完全抗原,本身就具有很好的免疫原性。外源小肽本文选用噬菌体为展示载体,构建蛋白质
展示于噬菌体表面相当于共价偶联在噬菌体上,噬特异性表位肽一噬菌体完全抗原,研究其免疫原性
菌体在此是一种载体蛋白。而噬菌体展示技术的最
以及其作为免疫原替代天然抗原的可行性,以最终
大特点是将展示的外源蛋白与其编码基因偶联起建立一种高通量的蛋白质抗体制备新方法。
来,利用这一特点可以实现作为免疫原载体的噬
材料与方法
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