文档介绍：【摘要】目的探讨三羟基异黄酮诱导食管癌一细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与一和之间的
关系。方法采用丌比色法测定三羟基异黄酮对一细胞的生长抑制率;以透射电镜和染色法研究三羟基异黄
酮与一细胞凋亡的关系;通过免疫组织化学法和—法检测一和的表达。结果三羟基异黄酮对一
细胞有明显抑制作用,随浓度增加和培养时问的延长而增强;三羟基异黄酮诱导一细胞出现凋亡细胞形态:染色法
可见,经三羟基异黄酮处理、、、后,一细胞凋亡数随时间明显增加。免疫组织化学发现经处理、、、
后,一细胞的一蛋白阳性率减少,蛋白阳性率增加。—也发现经处理、、、后,一细胞的
一条带密度降低,条带密度加强。结论三羟基异黄酮可能通过下调一的表达和上调的表达而
诱导食管癌一细胞发生凋亡。
【关键词】三羟基异黄酮食管癌细胞凋亡
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三羟基异黄酮具有抗肿瘤作用,可能与诱导细胞凋发生的可能机制,现报道如下。
亡有关,但其具体作用机制至今未明。我们通过透射电
材料和方法
镜和染色法,在体外定性、定量研究三羟基异黄
酮与食管癌一细胞凋亡的关系。并采用免疫组织. 材料和试剂食管癌一细胞由山东省立医
化学法和—检测凋亡相关基因一和的院肿瘤细胞室惠赠,三羟基异黄酮美国化学试
表达,探讨羟基异黄酮诱导食管癌一细胞凋亡剂有限公司产品采用二甲基亚砜溶解,细胞培
养液稀释,分别配成、、、·一浓度待用。
购于美国化学试剂有限公司。原位凋亡检测
作者单位: 杭州,浙江大学医学院附属第二医院消
化科吴婵妮为在职研究生,现在萧山医院工作试剂盒、一、单抗均为中山生物公司产品。
通讯作者:周海波—:. . 方法
.. 比色法将食管癌一细胞以/孑,,个循环。取扩增产
接种于孔板,对照组孔,实验组孔, 物,经·琼脂糖凝胶电泳。紫外透射分析仪下观察。
后更换培养液,实验组分为亚组,每组孑,,测得计量
入含、、、·浓度的三羟基异黄酮,分别资料均以表示,两组比较均采用配对检验。
培养、、,培养后的孔板每孑加入·的
结果
,培养箱℃孵育,吸上清,加
./孑,微量振荡器振荡,全自动酶标仪读取. 三羟基异黄酮处理食管癌一细胞、、
试验波长的吸光值。后的值见表。
.. 透射电镜取·三羟基异黄酮处理的表羟基异黄酮处理食管癌一细胞、、
后的值
食管癌一细胞孵育,胰蛋白酶消化收集,%
戊二醛固定,浸润,包埋, 超薄
切片,醋酸双氧铀一柠檬酸铅双重染色透射电镜观察。
.. 染色法实验组孔加含·
三羟基异黄酮,对照组孔,分别与食管癌
一细胞共育、、、。%酒精固定,
注:与对照组比较,.,.
.%过氧化氢溶液及预冷的蛋白酶处理细胞,
由表可见,、、、·浓度的三羟基
湿盒内荧光素标记,辣根过氧化物酶结
异黄酮处理食管癌一细胞、、后,值
合,显色。阴性对照用无荧光素标记体系处
随三羟基异黄酮浓度增加和培养时间的延长而减少,相
理标本。细胞核呈棕褐