文档介绍：蛋白酶产生菌的筛选组别:第*组班级:生工**班组员:***指导老师:***一、实验目的学****从自然界中分离蛋白酶产生菌二、实验内容蛋白酶产生菌的分离三、实验原理许多细菌和霉菌产生蛋白酶,细菌中的芽孢杆菌是最常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品悬液加热处理,杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌,将其接种到奶粉培养平板并进行培养,根据奶粉平板的水解圈做初筛。将初筛的蛋白酶产生菌接入产酶培养基振荡培养,测定蛋白酶的活力,最终得到产蛋白酶的芽孢杆菌。也可直接将细菌接种到奶粉培养平板进行培养,分离筛选其他蛋白酶产生菌。四、实验材料和用具材料:土壤样品试剂:牛肉膏蛋白胨培养及平板、奶粉培养基平板、45mL无菌水(带玻璃珠)、芽孢染色液、仪器及用具:紫外分光光度计、显微镜、恒温水浴锅、摇床、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒、容量瓶、漏斗、试剂瓶、漏斗、载玻片、滤纸、擦镜纸。五、操作步骤(一)配制所需培养基按照以下配方配制所需的培养基牛肉膏蛋白胨培养基:,蛋白胨1g,,~,水100ml,:,蛋白胨1g,,,水100ml,~,配制200mL(二)分离采集土壤样品,用无菌水植被1:10土壤悬液。取1:10土壤悬液5mL,注入已灭过菌的试管中,将此试管放入75~80℃水浴中热处理10min以杀死非芽孢细菌。~200μL,涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养平板,后将平板倒置,于30~32℃下培养24~,选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落,挑取少许菌苔涂片,做芽孢染色,判断是否为芽孢杆菌。(三)筛选1、从判定为芽孢杆菌的菌落处,分别挑取少许菌苔,先接种奶粉斜面培养基,再转接奶粉培养基平板上,30~32℃下培养24~48h。2、选择水解圈直径与菌落直径比值大的菌,接入牛肉膏蛋白胨培养基30-32℃振荡培养48小时,将发酵液过滤或离心,取清夜检测蛋白酶活力进行复筛。六、实验结果:相关图片:(2)菌株的分离根据菌落大小、形状、表面光泽、隆起程度、透明程度、边缘性状和菌落颜色的差别,最终从培养基上筛选出23个菌落。(3)将分离到的菌株分别接种到含脱脂奶粉的培养基上,置于32℃培养60h,于室温下观察是否产生细胞外蛋白酶,分解培养