文档介绍：蛋白酶广"生园的筛选
11!
组别：第*组
班级：生工**班
组员：***
指导老师：***
、实验目的
学****从自然界中分离蛋白酶产生蛋白酶广"生园的筛选
11!
组别：第*组
班级：生工**班
组员：***
指导老师：***
、实验目的
学****从自然界中分离蛋白酶产生菌
二、实验内容
蛋白酶产生菌的分离
三、实验原理
许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽泡杆菌是最常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品悬液加热处理，杀死非芽抱细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽泡杆菌，将其接种到奶粉培养平板并进行培养，根据奶粉平板的水解圈做初筛。将初筛的蛋白酶产生菌接入产酶培养基振荡培养，测定蛋白酶的活力，最终得到产蛋白酶的芽抱杆菌。也可直接将细菌接种到奶粉培养平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。
四、实验材料和用具
材料：土壤样品
试剂：牛肉膏蛋白豚培养及平板、奶粉培养基平板、45mL
无菌水（带玻璃珠）、芽抱染色液、
仪器及用具：紫外分光光度计、显微镜、恒温水浴锅、摇
床、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒、容量瓶、漏斗、试剂瓶、漏斗、载玻片、滤纸、擦镜纸。
五、操作步骤
（一）配制所需培养基
按照以下配方配制所需的培养基
牛肉膏蛋白豚培养基：,蛋白豚lg, NaCl 0. 5g, 琼脂〜,水 100ml, pH 配制200mL
奶粉培养基：,蛋白豚1g, NaCl , 琼脂 ,水 100ml, pH 〜7. 2 脱脂奶粉3g,配制200mL
（二）分离
采集土壤样品，用无菌水植被1:10 ±壤悬液。
取1:10 ±壤悬液5 mL,注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75〜80°C水浴中热处理lOmin以杀死非芽抱细菌。
取加热处理过的土壤悬液100〜200P L,涂布接种到牛肉膏蛋白豚培养平板，后将平板倒置，于30〜32C下培养 24 〜48h.
对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽泡染色，判断是否为芽抱杆菌。
（三）筛选
1、从判定为芽泡杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种奶粉斜面培养基，再转接奶粉培养基平板上，30〜32°C下培
养24〜48h。
2、选择水解圈直径与菌落直径比值大的菌，接入牛肉膏蛋白豚培养基30-32°C振荡培养48小时，将发酵液过滤或离心，取清夜检测蛋白酶活力进行复筛。
六、实验结果：
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