文档介绍：标题:包含弗林蛋白酶裂解序列的重组蛋白e23sFv-TD-tBID对HER-2阳性肿瘤细胞的选择性毒性的研究背景:,即人类表皮生长因子受体-。其涉及转导通路。该通路导致了细胞生长和分化。.HER-2存在于乳腺癌上的抗原,是免疫疗法的靶点。--2和ErbB受体家族的其他成员由单体转化为二聚体聚合可以激活其活性。(EGFR属于ErbB受体家族的一种)简介:,其属于生长因子受体家族,并且它本身带有酪氨酸激酶活性。%到30%的原发性人类乳腺癌中都有HER2/neu的高表达,其也与预后差有关。,所以它是理想的以抗体为导向的靶点。***依靠其毒性的效能,通过特异性的配体锁定癌细胞达到杀死肿瘤细胞的作用。***已成功地用于临床试验。e23sFv-TD-***e23sFv-PEA40,我们开发出一组重组免疫促凋亡分子。其包括了抗-HER2单链可变区抗体片段(scFv)。-2蛋白家族,。tBID是促凋亡活性的一个先决条件。tBID可以促进凋亡因子的释放。。图片:A代表:重组免疫促凋亡分子e23sFv-TD-tBID。N末端有HIS标签。B:表达重组蛋白的细菌SDS-PAGE分析。C:纯化后蛋白SDS-PAGE分析D:Westernblot分析。重组蛋白的活性鉴定::(内皮细胞)接种于96孔板。%牛血清白蛋白的PBS封闭后,加入纯化后的1μg/mLe23sFv-TDtBID孵育90min。再用抗HIS单抗和辣根过氧化物酶抗鼠IgG孵育2次,每次1h。在使用3,3',5,5'-四***联苯***后,在450nm处测其吸收峰。:在雌性BALB/c裸鼠(4-6周龄)右侧乳腺细胞接种5×106人乳腺癌SK-BR-3脂肪。用不同的治疗因子处理细胞:e23sFv-TD-tBID(5mg/KG,在0,2,4,6,8天时处理),赫赛汀(10mg/kg,处理时间同上),紫杉类药物紫杉醇(15毫克/公斤,1-3天时处理),阿霉素(5mg/kg,1天),PBS作对照。每周测定小鼠体重和肿瘤的大小两到三次。结果:图2:A表示,细胞酶联免疫吸附实验中e23sFv-TD-tBID对HER2阴性细胞HUVEC和HER2阳性细胞SK-BR-3的实验结果。B表示,各种HER2阳性的细胞,一种HER2阴性的细胞和重组抗体e23sFv-TD-tBID的特异性结合能力。C表示,当加入抗HER2单抗时,重组蛋白的特异结合能力,这个实验旨在说明附加物tBID并没有改变e23sFv的结合特异性。D表示,通过共聚焦显微镜观察到的SK-BR-3细胞中内化的重组免疫***(e23sFv-TD-tB