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转基因食品DNA提取及寡核苷酸芯片检测技术研究.pdf

上传人:2028423509 2014/4/17 文件大小:0 KB

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文档介绍:转基因食品崛〖肮押塑账嵝酒觳饧际醯难芯课题来源:国家公益性行业科研专项专名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员生物化学与分子生物学蔡翠霞马文丽教授庞义教授黄树林教授曹以诚·教授程远雄教授符立梧教授论文评阅人高国全教授胡志奇教授年广州业均又聃教搜南方医科大学级硕士学位论文
转基因食品崛〖肮押塑账嵝酒觳技术的研究⋯硕士研究生:蔡翠霞指导教师:马文丽教授摘要亿公顷,比年的蚬暝龀,而以转基因作物为原材料加工的食品已达上万种。转基因食品给人类带来了丰富的食品供应和巨大的经济效益,但到目前为止,转基因食品对人类健康的安全性一直受人们质疑【D承┳;因食品引起中毒、过敏反应、降低人体抵御病毒的能力、改变机体肠道菌群平和地区先后出台了相应的法律和管理方法,对转基因食品实行强制标识或自愿标识。年我国农业部颁布的《农业转基因生物标识管理办法》,规定对类种产品必须进行标识【。高效的转基因成分检测技术至关重要,而高质量0宓幕袢。亲;蚴硕士学位论文转基因生物,是利用现代分子生物技术,将某些生物的基因转移到其他物种中,改造生物的遗传物质,使其在形状、营养品质、消费品质等方面向人们所需要的目标转变。以转基因生物为直接食品或为原料加工生产的食品就是“转基因食品’’【。随着基因工程技术的日趋成熟及在农产品上的广泛应用,转基因食品应运而生,并以惊人的速度进入人们的生活。年全球转基因作物种植面积达衡等危害已有报道【弧NA宋は颜叩闹G槿ê脱≡袢ǎ澜缟系暮芏喙对转基因食品进行标识基于能检测到转基因成分。因此建立准确、快速、
裂解体系中的过程,纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分,如蛋白质、多糖、盐等杂质彻底分离去除的过程。裂解方法包括化学裂解法砻婊钚约罶、、高盐等⒚噶呀夥蛋白酶⑷芫浮⒘呀饷傅和机械裂解法磨等俊W畛S玫拇炕椒ǎ皇怯谢芗脸樘嵩俪恋恚墙橹蚀炕=橹纯化是利用某些固相介质,在特定的条件下选择性吸附的特点,实现核酸与蛋白质及其他杂质的分离。由于加工食品成分复杂,苹到到庋现兀虼舜蛹庸な称分刑崛,潜在困难很大。目前国内外很多学者在积极探索、深入研究各种高效的转基因食品崛》椒ā1狙芯空攵宰;蚴称返牟煌庸こ潭龋菇ê陀呕烁在碱性环境籰放,⑶彝ü岷辖鹗衾胱樱乐笵降解,具有经济、简便、高效等优点,目前已被广泛用于从微量血液、组织斑块、精ǘ群痛慷龋约觳饨峁行统计学分析,〉┰觯Ч隒提取方法并无明显差别;对比两种方法提取的冢下保存一个月内的觳庑Ч峁醇飨圆其次,对于轻中度加工食品,采用改良传统的法。法是提取植物木浞椒ǎ彩俏南妆ǖ雷疃嗟奶崛∽;蚴称稤的方法¨摘要品进行基因检测的前提和关键。核酸提取包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在种加工程度的食品奶崛》椒ā首先,对于转基因农产品,采用一ǹ焖偬崛∽;蚺┎稤,.且恢钟杀揭蚁┖捅蕉蚁┕簿厶遄槌傻幕Ю胱域鲜髦湫和的条件下,可导致细胞破裂,酉赴酥惺斑、骨骼等法医物证检材【.1狙芯勘冉瞎/..∽;,ǘ.,,慷畂别;┎返腄提取,效果理想。
法,利用硅膜吸附柱纯化跎儆τ寐确碌扔卸镜挠谢芗粒蟠笏醵塘呐ǘ群痛慷龋约觳饨峁型臣蒲Х治觯峁允靖牧第三,针对油脂经过深加工,康停沂芷苹笛现兀崛∧讯却蟮特点,本研究利用硅膜吸附柱为介质,结合L弼儆憔覦,建立了一种稳定有效的从食用油中提取姆椒ǎ溆τ糜个品牌种食用质检测方法和基于核酸水平的检测方法。由于蛋白质检测成本高,所需时间长,分蛋白质变性,检出率较低,现在该类检测实际工作中较少涉及。核酸水平的检测包括际酢⒒蛐酒际跫觳獾取5ゴ康腜检测技术有容易污染、易出现假阳性等缺点。基因芯片技术是近年来在生命科学领域兴起的一项生物查及鉴定。靶基因的标记是基因芯片实验流程的一个重要环节,多重┰和特异度【1狙芯空攵宰;蚴称大物种个品系的筛选基因、目的基因、硕士学位论文但是传统的法由于操作繁琐,耗时长,试剂组成复杂,酚、氯仿等有机溶剂易造成环境污染等问题,在使用上受到一定的限制。本研究改良传统操作时间,,慷龋.,差异具有显著性意义,表明该方法提取的Ч理想,同时将其应用于轻中度加工食品的崛≈校〉美硐胄Ч油的崛。怂峤卸ㄐ訮、、荧光定量觳猓Ч硐搿最后,高质量0宓奶崛∈亲;蚴称芳觳獾那疤嵊牍丶;成分的检测是最终目标。目前转基因食品检测包括基于外源蛋白质靶标的蛋白加上蛋白质对热敏感,加热过程中容易变性,经过加工的转基因食品,绝大部高新技术,具有快速、敏感、准确、高通量等特点,可对大样本的样品进行筛标记是在多重┰龉讨屑尤胗ü獗昙牵诶┰龅耐苯杏ü獗昙牵异性高。多重牖蛐酒峡梢允