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文档介绍：SYBR Green I使用介绍

SYBR Green I 核酸染料简介
SYBR Green I 是高灵敏的 DNA 荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单,无须脱色或
冲洗;至少可检出 20pg DNA,高于 EB 染色法 25-100 倍。SYBR Green I 与 dsDNA 结合荧光
信号会增强 800-1000 倍,用 SYBR Green I 染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低,可适
用于多种电泳分析。
SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电
场凝胶电泳和毛细管电泳等。
SYBR Green I 与双链 DNA 的亲和力非常高,因此可以用做电泳前染色,对分子生物学
中常用的酶(如:Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4 连接酶等)没有抑制作用;另外,SYBR Green
I 与 EB 相比,诱变能力大大降低。
SYBR Green I 核酸染料特点
●灵敏高:至少可检出 20pg DNA,高于 EB 染色法 25-100 倍。
●信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
●操作简单:无须脱色或冲洗。
●适用范围广:可适用于多种电泳分析。
●使用方便:不影响其它修饰酶作用。
●经济:价格比银染便宜。

电泳用 SYBR Green I 使用方法简介
一、SYBR Green I 预染色方法
1、该方法适于琼脂糖凝胶电泳和 PAGE 凝胶电泳。
2、工作液的配制:用电泳缓冲液将 10000×的 SYBR GreenⅠ稀释 100 倍,即为 SYBR Green
Ⅰ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置 2-8℃冷藏一个月以上。
3、制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
4、样品染色:向分析样品中加入 SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液,室温放置 10 分钟,

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使 SYBR GreenⅠ与样品中 DNA 充分结合。SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的 1/10。
5、DNA Marker 染色:将 5μL DNA Marker 和 5μL DNA Marker 稀释液和 1μLSYBR Green
Ⅰ工作液混匀,室温放置 5 分钟,使 SYBR GreenⅠ与 DNA 充分结合。
6、上样、电泳:按常规操作。
二、SYBR Green I 后染方法
1、按照常规方法进行电泳。
2、用 PH - 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照 10000:1 的比例稀释 SYBR Green
Ⅰ浓缩液,混匀,制成染色溶液。
3、将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温
振荡染色 10-30 分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上
染色,将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色 30 分
钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
三、SYBR Green I 使用注意事项
1、在"SYBR GreenⅠ预染色方法"中,电泳时间不要超过 2 小时