文档介绍：南华大学
硕士学位论文
铅诱导的HK-2细胞氧化应激及线粒体损伤的实验研究
姓名:雷义
申请学位级别:硕士
专业:预防医学卫生毒理学
指导教师:陈锋;朱茂祥
20070501
铅诱导的 HK-2 细胞氧化应激及线粒体损伤的实验研究
研究生: 雷义
导师: 陈锋、朱茂祥
专业: 卫生毒理学

中文摘要
目的:研究铅诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2 细胞)的损伤作用,并从氧化
应激及线粒体损伤方面探讨其可能的作用机制。
方法:以不同浓度的醋酸铅与HK-2 细胞共培养不同时间研究其对细胞的毒性作用;
以 200µmol/L 铅+200 U/ml SOD、 200µmol/L 铅+100 U/ml 过氧化氢酶、
200µmol/L 铅+50 mmol/L甘露醇,作抑制效果分析;以 200µmol/L HB2BOB2B作阳性对
照分析。AUTOLAB全自动生化仪采用动式测量法测量细胞外LDH,MTT法检测细
胞活力及线粒体功能,AnnexinV和PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡率及坏死
率;荧光染料DCFH-DA、Monochlorobimane、罗丹明 123(Rh123)及 10-N-nonyl
acridine orange (NAO)结合荧光化学发光仪分别检测细胞内活性氧簇(ROS)、细胞
内GSH、线粒体膜电位(MMP)及心磷脂的变化;硫代巴比妥酸(TBA)荧光法检
测脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量;免疫荧光化学法结合流式细胞术检测细胞
色素c(Cyt c)的释放。实验数据以均数±标准差(x±s)表示,
软件进行统计分析。
结果:①细胞 LDH 漏出增加,细胞活力及线粒体功能降低,细胞凋亡率增加,其
改变与铅剂量和处理时间呈依赖性。②铅呈时间依赖性及剂量依赖性地增加细胞内
ROS,降低 GSH 含量,使氧化产物 MDA 生成增加;③MMP 下降,线粒体心磷脂
遭受氧化损伤,Cyt c 从线粒体释放入胞浆,与铅呈时间依赖性及剂量依赖性改变。
④SOD 及过氧化氢酶未能有效地抑制铅的毒性作用,而甘露醇则表现出较强的抑制
效果。
结论:
1. 铅能够诱导 HK-2 细胞损伤,且具有时间效应关系及剂量效应关系。
II
2. 铅能诱导 HK-2 细胞氧化应激及线粒体损伤。ROS 启动的、线粒体介导的细
胞凋亡可能是铅诱导的 HK-2 细胞损伤的主要途径。
.-
3. 铅诱导的HK-2 细胞氧化应激可能主要是由OHP P引起的。

关键词:铅, HK-2 细胞, ROS, 线粒体

III
Empirical study on oxidative stress and mitochondria lesion in
HK-2 cell induced by lead

Abstract

Objective: To observe the damage effect on human renal proximate tubular
epithelial cell (HK-2 cell) induced by lead, and to investigate the possible mechanisms
from oxidative stress and mitochondria lesion.
Methods: HK-2 cell was cultured in vitro, and exposed to various concentrations of
lead acetate by different time. Transudatory lactate dehydrogenase (LDH) was
measured by automatic biochemistry meter with dynamic metry method. The viability of
cells and mitochondrial function was mediated by MTT method. Apoptosis rate and
necrosis rate induced by lead was determined by flow cytometry with Annexin-V (FITC
labeled) and Propidium Iodide (PI). Variance of reactive oxyge