文档介绍：南华大学
硕士学位论文
ox-LDL对骨髓干细胞分化的平滑肌细胞泡沫化的影响
姓名:李世煌
申请学位级别:硕士
专业:药理学
指导教师:严鹏科
20070501
原创性声明
本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及
取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,
论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得南华
大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本
研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。
作者签名: 日期: 年月日
关于学位论文使用授权说明
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留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部
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国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。
作者签名: 导师签名: 日期: 年月
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ox-LDL 对骨髓干细胞分化的平滑肌细胞泡沫化的影响
硕士研究生李世煌
导师严鹏科
摘要
目的:建立体外诱导骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞模型,比较氧化低密度脂蛋白
对骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞及血管平滑肌细胞泡沫化的影响,探索分化的平
滑肌细胞在动脉粥样硬化发生发展过程中的作用。
方法:采用贴壁法从SD大鼠骨髓中分离骨髓间质干细胞(bone mesenchymal stem
cell,BMSC),从胸主动脉分离血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)。运
用条件培养基诱导BMSC分化成SMC,采用免疫荧光法分析骨髓间质干细胞及其分化
后的细胞特异性标志物。80mg/L ox-LDL分别处理骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞
和VSMC 0、12、24、48、72小时;0、20、40、80mg/L ox-LDL分别处理骨髓间质干
细胞分化的平滑肌细胞和血管平滑肌细胞72小时,油红O染色观察细胞内脂滴,HPLC
检测细胞内的总胆固醇、胆固醇酯含量。Western bloting检测细胞清道夫受体CD36的
表达变化。
结果:1、分离的BMSC呈长梭形,免疫荧光检测细胞表达CD44,但不表达CD34,呈骨
髓间质干细胞表型。用含碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子(TGF-β)
的条件培养基诱导分化15天后,诱导分化的细胞形态呈梭形平滑肌样。表达平滑肌细
胞特异性蛋白标志物α-肌动蛋白和平滑肌肌球蛋白重链1,呈平滑肌细胞表型,命名为
骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞(smooth muscle cell differentiated from bone mesen-
chymal stem cell, BMSC-SMC)。
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2、骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞(BMSC-SMC )经 80mg/L的ox-LDL处理
0、12、24、48、72小时,随着处理时间延长,细胞内总胆固醇含量、胆固醇酯含量
逐渐增加,±µg/mg蛋白,较未处理时的
±µg/,差异有显著性(P〈);胆固醇酯/总胆固醇值为
%,,差异有显著性(P〈);符合泡沫细胞特征。相
同处理的VSMC(80mg/L ox-LDL,处理 72小时)±µg/
mg蛋白,胆固醇酯/ %,与BMSC-SMC比较,差异均有显著性(P
〈)。
在量效关系方面,0、20、40、80mg/L ox-LDL,处理 BMSC-SMC72 小时,细
胞内总胆固醇含量分别为 ±、±、±、±µg/mg;胆固
醇酯/总胆固醇值分别为 %、%、%、%,提示随着 ox-LDL 浓度增高,
细胞内总胆固醇、胆固醇酯含量逐渐增加。BMSC-SMC 与相同处理的 VSMC 细胞内
总胆固醇、胆固醇酯/总胆固醇值比较,增幅较大,差异均有显著性(P〈)。
80mg/L ox-LDL作用细胞72小时,油红O染色观察到BMSC-SMC体积增大、细胞
内出现大量脂滴,呈典型的泡沫细胞形态,且细胞内脂滴较VSMC明显增多。
3、Western bloting检测发现,未处理BMSC-SMC少量表达清道夫受体CD36,经
80mg/L ox-LD