文档介绍：调控疨诱导疪赴俜只课题来源:国家自然科学基金专名病理学与病理生理学学位申请人指导师答辩委员会主席答辩委员会成员黄学平赵彤教授丁彦青教授张雅洁教授钟雪云教授申李建明教授论文评阅人李学农教授月日广州疨称教洪教授业南方医科大学级硕士学位论文‘“’’,】/
\鼎调控/盏钾课筍细胞再分化机制硕士研究生:黄学平指导教师:赵彤教授摘要研究背景目前研究表明恶性肿瘤的发生与细胞分化紊乱或分化阻滞密切相关,而肿瘤治疗不管是放疗、化疗,还是分子靶向治疗以及生物治疗,都是采取杀灭肿瘤细胞的治疗理念,这些治疗方法在杀灭肿瘤细胞的同时对正常细胞也有一定的杀伤作用。越来越多的研究表明,在体内外诱导分化剂的作用下,恶性肿瘤细胞的形态、生物学或生物化学方面的诸多标志均向正常细胞的方向演化分化,甚至完全转变成正常细胞或接近正常细胞,这种现象称肿瘤细胞的再分化虼擞盏挤只瘟平ǔ晌N蠢粗琢鲋瘟频囊桓鲂碌姆⒄狗较颉霍奇金淋巴瘤,且恢至馨驮煅O低车亩裥灾琢觯年由英国的钤缑枋觯渲芯湫突羝娼鹆馨土颊蓟羝娼鹆馨土霾±ァ8眉膊〉牡湫托翁氐是少数的肿瘤性疪疪赴%笤诖罅康难仔苑应背景细胞中。嗄昀矗琀/细胞的本质以及发生发展机制等问题一直困扰着医学界。炔捎孟晕⑶懈罴际醮幼橹衅咸羧〉ジ鯥/细胞,通过单细胞际醴治鯥蛑嘏胖な稻蟛糠值腍/细胞来自淋巴器官生发中心,那暗蛲鯞细胞,也称为“残疾的馨拖赴,该细胞具有赴硇投JШ头⒂蝗ǖ脑缙诮赴只蹦艿菳细胞分化紊乱的特硕士学位论文
研究目的观测和诹馨徒岱从π栽錾点。寻找疪赴⑸讨械贾路只柚偷墓丶械悖鹘谄洹翱9匾唬疪赴聪諦细胞的特征,回到赴只恼7较颍潜狙芯康墓丶有报道反义表达质粒转染人馨土鱿赴闎虸后,形态和免疫表型与疪赴O嗨疲崾綜泶锵碌魇荋/细胞形成关键分子事件。转录因子盏糂细胞向浆细胞分化的一个开关,是浆细胞分化所必需的至关重要的调控因子。目前研究认为在蠵是一个重要的抑癌基因,其功能性失活阻断了赴虺墒旖赴姆只赡苁莄致病重要原因。疪赴哂性缙诮赴只蹦埽盏糎/细胞向末端赴较蛟俜只须打开庖唤赴鹘诠乜āW罱芯糠⑾謒在赴只虰细胞恶性肿瘤中发挥重要作用。韧üü馑孛副ǜ媸笛橹な翟赾细胞株中莔调控的直接靶标,梢愿盒缘骺豍的表达。因此,赡苁堑贾翲/细胞分化阻滞的又一重要靶标。本课题组前期构建了基因稳定过表达的赴闘赴窍担命名为“.诖嘶∩媳狙芯坎捎妹庖呦赴А⑹凳庇ü舛、、免疫荧光共聚焦、原位杂交、匆骞押塑账崴时转染、生物信息学分析等方法,,观测上调后细胞赴只喙乇硇汀⑾赴翁Ш拖赴镅为等改变,明确上调的疪赴芊窀聪諦细胞表型、打开向浆细胞分化的开关基因⒂盏枷蚰┒薆细胞方向再分化可能性及调控机制,验证贖/细胞的表达、对靶点牡骺毓叵导疤教钟盏荚俜只能性,为进一步阐述疪赴姆⑸⒄够铺峁┎慰家谰荨本研究拟通过四部分进行:一、和赾组织和细胞水平的表达中文摘要Ⅱ
研究内容与方法组织及其细胞株、癟细胞淋巴造血系统肿瘤细胞株中的表达差异。二、调控谋泶镉盏糎/细胞再分化探究和牡骺毓叵担魅飞系鰿蚨詂细胞株细胞诊断标记、赴庖弑硇鸵约敖赴硇偷挠跋欤沂綜蛟赾发生及分化所扮演的角色。三、贖/细胞中的表达及对靶点牡骺定量和定位、转染沉默验证贚赴谋泶锛岸园械鉖的调控。四、和嗷サ骺毓叵档某醪窖芯初步实验并借助生物信息学分析和南嗷サ骺赝纾骄緾蚉的调控关系。一、和赾组织和细胞水平的表达收集蚏橹瓯荆ü鼵蚉的免疫组化比较其在组织上的表达差异,并进一步通过和免疫细胞化学方法检测和在六株赴丛春腿闠细胞来源淋巴瘤细胞株的表达。,经荧光显微镜观察载体绿色荧光蛋白表达,利用实时荧光定量、和免疫荧光共聚焦检测和蛋白表达。瓹蚬泶锒詂细胞株形态特征和生物学特性的影响利用笛椤旧ê凸肀驶冯娜旧ḿ彀腎蚬泶锒訪赴殖能力、形态大小以及细胞骨架蛋白的影响。瓹蛏系鞫訪赴只喙氐鞍椎挠跋硕士学位论文妒Ⅱ
赗橹珻饕1泶镉诹馨吐伺萃馓浊吐伺菁淝琍在生发中心的明带呈散在弱阳性表达:例橹校挥例在疪胞表达阳性,,在细胞和其他赴鹪吹牧馨土鱿赴曛斜泶锝系蜕踔寥笔А
二、调控谋泶镉盏糏/细胞再分化甃瓹赴窍翟谟ü庀晕⒕迪戮杉锨康穆躺ü猓凳庇ü舛和共聚焦显微镜检测显示,与裸细胞组和空载体组比较,.细胞亚系基因和蛋白表达均增高。甅检测发现,基因过表达组较空载体组增殖减慢,.;染色后计数,.细胞亚系赴甲细胞数比例为.%,较对照组细胞±.;鬼比环肽染色发现,与对照组相比,.细胞丝足消失,皮层丝状肌动蛋白变薄。和共聚焦检测结果显示,相对于裸细胞组和空载体组,基因过表达组鞍妆泶锩飨栽黾樱幻庖呦赴Ш土魇较赴觳夥⑾郑珻基因过表达后,与对照组相比,、和表达降低,、、、、和表达增高,而和谋泶锩挥忻飨愿