文档介绍：复旦大学
博士学位论文
PSMD1和ATG3基因在骨髓增生异常综合征向白血病转变中作用的
研究
姓名:王琳
申请学位级别:博士
专业:内科学
指导教师:许小平
2012-04
虯蛟诠撬柙錾斐W酆险飨虬籽2∽1中作用的研究中文摘要中父摘要第一部分聊琍基因对骨髓增生异常综合征细胞系生物学特性的影响目的:我们课题组采用巢式病例对照研究,首次建立了我国扇顺醴ⅰ⑽治的骨髓增生异常综合征颊叩难芯慷恿校⒍云渌娣谩V了娣弥盏悖%颊叩玫剿娣茫%颊呤Х谩9灿颊咦;急性白血病±,颊呶醋;<毙园籽2对照组4硬±樘选颊撸鸩∈焙妥0资钡墓撬璞瓯窘腥巳ɑ蜃楸泶镄酒觳猓瓿自身对照研究。按照簂配比,从病例组和对照组中各挑选满足配对条件的患者的起病时骨髓标本进行全基因表达谱芯片检测,完成病例对照研究。最终筛选出由趸蜃槌傻淖蛹梢越ú±楹投哉兆槊飨浴⑽冉〉厍鹂!U条基因按差异程度依次为、蚑其中,差异最大的为基因,课题组成员已完成对它的研究,所以我们选取了差异仅次于基因的蚪邢乱徊窖芯俊本研究应用际醵訮基因进行沉默,观察虺聊昂细胞系生物学特性的变化,初步探讨蚩赡茉贛向白血病转变0过程中的作用。方法:采用阳离子脂质体转染方法,。转染小时后收集细胞,测定转染效率。使用椒ḿ觳庾H咀楹投哉兆橄赴蠵基因水平的表达情况。观察、⑾赴芷凇⑾赴亡的变化,以及对痵∈竽P偷挠跋臁结果:转染匾煨詓后小时,觳饨峁允荆鹤复旦大学博士学位论文
;蚩赡芡ü跋霱的泛素蛋白酶体系统在0坠讨关键词:骨髓增生异常综合征;细胞系,;基因,籹;脂质体;泛素蛋白酶体系统染组虻膍泶锼浇衔醋H咀橄灾陆。,细胞系的期细胞比例下降,/。细胞凋亡结果显示,,早期凋亡%%胪砥诘蛲%痵∈蠊鄄欤峁允荆毫阶樾∈笊ぷ刺己茫形闯鱿置飨缘纳差、消瘦、萎靡少动、毛色晦暗、松散等与疉相关的症状,可能与模型的建立时间尚短有关,还需对小鼠继续观察。结论:转染匾煨詓,,细胞周期被阻滞在疓冢赴蛲鍪恳裁飨栽龆唷/小鼠实验结果显示,畇转染组的小鼠与阴性对照组相比,成瘤率、存活率未见明显区别。提示细胞沉默蚝笾琢錾镅形S所改变,恶性程度有所降低,但对痵∈竽P偷挠跋焐胁幻魅罚孕杓绦起作用。目的:我们已经通过巢式病例对照研究和全基因组表达谱芯片分析,筛选出了条基因组成的子集,可以将病例组和对照组稳健区分。其中,醪钜旎蛭I调基因,仅为下调的差异基因。本研究应用慢病毒技术,提高细胞系中基因的表达,观察基因过表达前后赴瞪镅匦缘谋浠醪教教諥蚩赡茉0坠讨械淖饔谩方法:构建带有基因的慢病毒载体,通过慢病毒感染细胞系,提复旦大学博士学位论文%
.的细胞比例下降,而晚期凋亡和死亡关键词:骨髓增生异常综合征;细胞系,;基因,;过表达;慢病毒高细胞系中基因的表达。使用从蛋白水平检测表达情况。使用觳獠《镜味取1泶锕鄄旌捅冉螦蚬达前后0紫赴翟谙赴盍Α⑸で摺⑾赴蛲觥/小鼠模型等生物学特性的改变。结果:构建慢病毒后,测序结果显示与目标序列一致,检测质粒表达情况,结果显示条带与目的基因融合蛋白吻合,质粒构建成功。运用觳獠《镜味任×/。将带有基因的过表达慢病毒感染细胞小时后,:与阴性对照组相比,%,阴性对照组的细胞活力为%.慢病毒过表达组的细胞与阴性对照的细胞相比,早期凋亡%.的细胞比例明显上升。对过表达组和阴性对照组的痵∈蠊鄄欤阶樾∈缶未出现明显的弓背、消瘦、萎靡少动、毛色晦暗、松散等与疉相关的症状,可能与模型的建立时间尚短有关,还需对小鼠继续观察。结论:将过表达基因的慢病毒载体感染赴岛螅琒细胞的生物学特性发生改变。过表达慢病毒感染后的细胞死亡比例高于阴性对照组。过表达慢病毒感染细胞系后,细胞系的增殖能力受到抑制。慢病毒过表达基因后有促使赴釉缙诘亡进入晚期凋亡和死亡的作用。但过表达对痵∈竽P偷挠跋焐胁明确,仍需继续观察。基因可能通过提高细胞的线粒体白噬水平,减少鹕耍柚沽讼赴徊较虬籽2∠赴;档土讼赴亩裥猿潭取型挤掷嗪臸:复旦大学博士学位论文
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