文档介绍：山东医药年第卷第期
株鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐药
基因分析
曹阳。马全玲,魏殿军。赵猛
天津医科大学第二医院,天津
摘要:目的探究鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐药的机制。方法收集年一月天津市三所三甲医院各类
标本分离的鲍曼不动杆菌株。采用聚合酶链反应扩增技术对质粒介导喹诺酮类耐药基因、、
、..、及染色体基因和进行基因检测,并对阳性结果进行酶切和测序鉴定。结果
株鲍曼不动杆菌中、、和基因均为阴性,.基因株阳性,经测序证实均未出现变异
株环丙沙星耐药的鲍曼不动杆菌中株.% 基因不被酶切,株%基因不被
酶切,证实有基因突变存在。结论天津地区尚未发现鲍曼不动杆菌中存在质粒介导的喹诺酮耐药机制,和
基因变异仍为鲍曼不动杆菌喹诺酮耐药的主要原因,但同时亦有其他喹诺酮耐药机制的存在。
关键词:鲍曼不动杆菌;质粒;喹诺酮类耐药基因
中图分类号:. 文献标志码: 文章编号:
近年来,多重耐药鲍曼不动杆菌引起感染的报噻肟、头孢哌酮/舒巴坦、庆大霉素、头孢西丁、复方
道明显增多,由于该菌对常用抗菌药物耐药严重,临新诺明、亚胺培南、氯霉素、氨曲南、左氧氟沙星、美
床治疗棘手,因此常造成医院内感染的暴发流行。罗培南。判定标准参考版规定。
以往认为造成细菌喹诺酮耐药的机制主要是靶位基. 喹诺酮类耐药基因检测
因的变异、外膜孔蛋白通透性下降和外排泵的作用, .. 模板提取采取煮沸法。将临床分离
以上机制均由染色体所介导。近年来,质粒介导的鉴定的鲍曼不动杆菌接种到含有液体培养
喹诺酮类耐药机制引起国内外学者广泛关注, 基的试管中,℃震荡培养—,/
但关于质粒介导的喹诺酮类耐药基因的发现几乎均离心,弃去上清,沉淀用双蒸水涡旋混
存在于肠杆菌科细菌中,而在非发酵菌中质粒介导匀,℃煮沸,冰浴,/
的耐喹诺酮基因仅有个别报道】。近期我们对天离心,取上清与等量的氯仿约混
津地区年鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐药基因情匀,℃/离心,小心吸取上清,上
况进行了分析,旨在探究鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐清即为用于扩增的模板,放于一℃保存备
药的机制。用。
材料与方法.. 、、、、一、和
. 材料年~月天津三所三级甲等医基因扩增①引物设计:参照文献,
院各类临床标本,包括痰、血液、伤口分泌物等中分产物的大小分别为、、、、、、
离的非重复鲍曼不动杆菌株。质控菌株为大肠。②反应体系:总体积。其中
埃希菌,铜绿假单胞菌。酶. ,上下游引物各,模板,
质粒介导喹诺酮类耐药基因、、、去离子水. 。试剂购自宝生物工程有限公司。
一—、阳性对照株由上海华山医院抗生、、、、一基因循环参
数:℃预变性,℃变性,℃退火
素研究所王明贵教授惠赠。
,℃延长,循环次,最后℃延伸
. 药物敏感试验采用肉汤稀释法测定鲍曼不
动杆菌各种药物的最低抑菌浓度,抗菌药物。和基因扩增的循环参数:℃预
变性;,【,,循
包括环丙沙星、头孢他啶、氧氟沙星、阿米卡星、头孢
环次;最后℃延伸。扩增产物用.%
基金项目:天津市卫生局科技基金资助项目。琼脂糖凝胶电泳。③和基因的酶切分析:
·通讯作者取× ,/ 的内切酶,
山东医药年第卷第期
基因扩增产物,去离子水,℃水浴亮氨酸取代。能被酶切的耐