文档介绍：主讲内容PCR技术简介PCR常见问题、原因分析及其解决方案提高PCR反应特异性的策略PCR标准反应体系•DNA模板•引物•反应缓冲液•dNTP•ddH2O•耐热聚合酶反应体系对PCR扩增的影响DNA模板•纯度蛋白、多糖、酚类等杂质会抑制PCR反应•完整性模板降解会导致PCR扩增无产物•浓度加量过多导致非特异性扩增增加引物•特异性长度适当、避免二级结构和二聚体•完整性避免反复冻融•浓度应适当,过高导致非特异性增加,过低则扩增产物太少反应体系对PCR扩增的影响反应Buffer•pH值,盐离子浓度•稳定剂,增强剂Mg2+浓度•过高非特异性严重•过低无扩增产物dNTPMixture•浓度适当•避免反复冻融ddH2O•pH值适当•避免污染PCR标准反应体系•DNA模板•引物•反应缓冲液•Mg2+•dNTP•ddH2O•耐热聚合酶如何选择最合适的DNA聚合酶•DNA聚合酶的特性•PCR实验的不同需求如何选择最合适的DNA聚合酶--DNA聚合酶的特性纯度稳定性酶活性如何选择最合适的DNA聚合酶--PCR实验的不同需求特异性保真性长片段扩增扩增效率PCR试剂盒基因组扩增、RT-PCR基因筛选、测序、基因克隆构建基因图谱、测序、分子遗传学复杂模板扩增(GC含量高、二级结构)复杂模板扩增、大规模基因检测特异性-热启动Taq酶原理特点•蜡封用途•抗体抑制•化学修饰•避免非特异性扩增•提高PCR反应的特异性•基因组扩增•RT-PCR