文档介绍：。五、电镜标本制作方法现以透射电镜标本的制作为例作简扫描电镜用于细胞表面的观察,透射电镜用于细胞内部结构的观察。电镜标本用于观察组织细胞的超微结构。要介绍:lmm3。取材标本的新鲜程度要求高于光镜标本,组织块小于一()℃,~4这些液体穿透力较强,能稳定和保存细胞内的结构。%戊二醛磷酸缓冲液和1%锇酸。(二)固定1~2小时。固定时间分钟。与双蒸水等量混合配成。()(三)冲洗以上步骤均在(90%***90%酒精1/290%酒精+1/290%***混合液%(四)脱水脱水剂多采用浓度递增的酒精和***,从5070%分钟。100%***,间隔10~150~4℃冰箱中进行)。为了使反应速(简称DDP)812和固化剂十二碳烯基丁二酸酐(简称DD-SA),加入适量增塑剂苯甲酸二丁酯(五)包埋包埋剂为环氧树脂618或简称DMP-30)。)***]苯酚(,度增快,可加入加速剂24,6-三[(二甲氨基60%环氧树脂618或812包埋剂配方:40%DDSA3%DBP1%DMP-30℃温箱内排出气泡。包埋前组织块必须浸透,入无水***加等分钟,静置于35~40上述试剂依次加入,边加边搅拌,全部加完后再充分搅拌10~15体积包埋剂室温3小时,纯包埋剂37℃2小时。包埋时先将纯包埋剂倒入胶囊或含硅胶的包埋槽内,置入组织块。包埋后在60C温箱中烘2~3天后硬化成块,即可剥去胶囊或包埋槽。(六)将组织块修成塔形,×,用超薄切片机切成50mm厚的超薄切片,再置于铜网上。(七)染色常用的染液有1~2%醋酸铀和枸橼酸铅。醋酸铀染色是在组织块进行脱水过程中进行的,而枸橼酸铅染色则多用于片染。最后,将载有切片的铜网置于透射电镜内观察和摄影。由于电镜电子束穿透能力的限制,,这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。一取材的基本要求组织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种酶的作用,出现细胞自溶现象。此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷:(1).动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内(争取在1分钟内)%戊二醛固定液。(2).所取组织的体积要小,一般不超过1mm×1mm×1mm。也可将组织修成1mm×1mm×2mm大小长条形。因为固定剂的渗透能力较弱,组织块如果太大,块的内部将不能得到良好的固定。(3).机械损伤要小,解剖器械应锋利,操作宜轻,避免牵拉、挫伤与挤压。(4).操作最好在低温(0℃~4℃)下进行,以降低酶的活性,防止细胞自溶。(5).取材部位要准确。取材方法:将取出的组织放在洁净的蜡版上,滴一滴预冷的固定液,用两片新的、锋利的刀片成“拉锯式”将组织切下并修小,然后用牙签或镊子将组织块移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果组织带有较多的血液和组织液,应先用固定液洗几遍,然后再切成小块固定。透射电镜工作原理:利用电子射