文档介绍：五、电镜标本制作方法
电镜标本用于观察组织细胞的超微结构。扫描电镜用于细胞表面的观察，透射电镜用于细胞内部结构的观察。现以透射电镜标本的制作为例作简
要介绍：
（一）取材标本的新鲜程度要求高于光镜标本，组织块小于 lmm3。
（二）固定常用的固定液有 %戊二醛磷酸缓冲液和 1 %锇酸。这些液体穿透力较强，能稳定和保存细胞内的结构。固定温度应控制在 0〜4 "C,
固定时间1~2小时。
（三）冲洗冲洗液由0. 2mol/L磷酸缓冲液（）与双蒸水等量混合配成。冲洗组织块。
（四）脱水脱水剂多采用浓度递增的酒精和***，从 50% 70 % 90 %酒精 1/2 90 %酒精+1/2 90 %***混合液 90 %***（以上步骤均在
0~4C冰箱中进行）100 %***，间隔10~15分钟。
（五）包埋包埋剂为环氧树脂 618或812和固化剂十二碳烯基丁二酸酐（简称DD-SA），加入适量增塑剂苯甲酸二丁酯（简称DDP）。为了使反应速
度增快，可加入加速剂 2, 4, 6-三［（二甲氨基）***］苯酚（简称DMP-30）。
包埋剂配方：环氧树月旨618或812 60 %
DDSA
40 %
DBP
3 %
DMP-30
1 %
上述试剂依次加入，边加边搅拌，全部加完后再充分搅拌 10〜15分钟，静置于35~40 C温箱内排出气泡。包埋前组织块必须浸透，入无水***加等
体积包埋剂室温 3小时，纯包埋剂 37 C 2小时。包埋时先将纯包埋剂倒入胶囊或含硅胶的包埋槽内，置入组织块。包埋后在 60C温箱中烘2〜3天
后硬化成块，即可剥去胶囊或包埋槽。
（六）将组织块修成塔形，尖端面积为）.3mm左右，用超薄切片机切成 50mm厚的超薄切片，再置于铜网上。
（七）染色常用的染液有1~2%醋酸铀和枸橼酸铅。醋酸铀染色是在组织块进行脱水过程中进行的，而枸橼酸铅染色则多用于片染。最后，将载
有切片的铜网置于透射电镜内观察和摄影。
由于电镜电子束穿透能力的限制，必须把标本切成厚度小于，这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切
片厚度是50-70nm。
在透射电镜的样品制备方法中，超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似，需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
一取材的基本要求
组织从生物活体取下以后，如果不立即进行适当处理，会由于细胞内部各种酶的作用，出现细胞自溶现象。此外，还可能由于污染，微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此，为了使细胞结构尽可能保持生前状态，必须做到快、小、准、冷：
（1）.动作迅速，组织从活体取下后应在最短时间内（争取在1分钟内）%戊二醛固定液。
⑵.所取组织的体积要小，一般不超过1mnMmm<1mm也可将组织修成1mm1mm2mn大小长条形。因为固定剂的渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将不能得到良好的固定。
（3）.机械损伤要小，解剖器械应锋利，操作宜轻，避免牵拉、挫伤与挤压。
⑷.操作最好在低温（0 C〜4C）下进行，以降低酶的活性，防止细胞自溶。
（5）.取材部位要准确。
取材方