文档介绍：红芪多糖的纯化及初步结构鉴定
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:惠和平,封士兰,赵良功,石义凯,刘小花
【摘要】目的研究红芪多糖的分离纯化及初步的结构。方法采用超声辅助提取多糖,比较 Sevag法、三氯乙酸法和三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白的效果,并用 GC、TLC及 IR分析多糖的初步结构。结果三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白,经 Sephadex G-25柱层析分离纯化后得红芪多糖2(HPS-2),HPLC确定为均一多糖,糖含量为 %,糖组成分析表明其含有鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖,摩尔比为 ∶∶∶∶。结论HPS-2是一种以β苷键为主的吡喃型杂多糖。
【关键词】红芪多糖; 薄层色谱; 结构鉴定
红芪(Radix Hedysari),为豆科岩黄芪属植物多序岩黄芪Hedysarumpolybotrys Hand.-Mazz的干燥根,为甘肃特产名贵药材,在临床上主要用于补气固表, 利尿托毒, 排脓, 敛疮生肌。红芪中含有氨基酸、有机酸、β-谷甾醇、红芪多糖、微量元素等众多的生物活性物质[1]。近年来研究发现,红芪多糖的活性成分具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、治疗糖尿病等作用[1,2]。特别是我们近几年的研究发现,经 70%乙醇沉淀部分药理作用尤为明显。由于多糖为大分子化合物,分离纯化比较困难,而蛋白质的脱除是后期结构鉴定的关键之一,为了提高多糖的得率、纯度及活性,本实验对这部分多糖进行了脱蛋白方法的研究,结合TLC、GC、IR等方法对 HPS-2 的结构进行了初步的分析,以期为红芪多糖的进一步研究提供理论基础。
1 材料与仪器
红芪,购自甘肃武都;牛血清白蛋白、考马斯亮蓝 G-250(西安周鼎国生物技术有限责任公司);单糖对照品(中国药品生物制品检定所);Sephadex G-25(上海长征制药厂);硅胶 G(青岛海洋化工厂);其它试剂均为分析纯。
CR22G Ⅱ型离心机(日本日立);UV-1700 型紫外仪(日本岛津);GC-Clarus 500型气相色谱仪(美国 PerkinElmer公司);红外光谱仪(Nicolet NEXUS 670);BS-100A 自动部分收集器、HL-2 恒流泵(上海沪西分析仪器厂有限公司);美国Waters600型高效液相色谱仪,配 Waters2414型示差折光检测器。
2 方法
红芪多糖的提取纯化路线其流程如下。
提取红芪药材→粉碎→超声脱脂→热水提取3次→合并提取液
→减压浓缩后离心→取上清液→乙醇沉淀→有机溶剂洗剂→透析→减压浓缩→冷冻干燥得粗多糖 HPS。
纯化粗多糖液→脱蛋白、色素→Sephadex G-25柱层析→洗脱液透析→浓缩→冷冻干燥→精制红芪多糖 HPS-2。
蛋白质和多糖含量的测定蛋白质含量测定采用考马氏亮蓝法[3],多糖含量采用苯酚-硫酸法[4]。
脱蛋白方法
称取一定量的粗多糖,加入适量蒸馏水,60℃加热溶解,备用。本实验采用 3种脱蛋白的方法。
Sevag法取粗多糖溶液,加入等体积的氯仿-正丁醇(V/V为 4∶1)试剂,混合振摇 30