文档介绍：内毒素休克小鼠肝脏核蛋白质组学研究月广州课题来源:
/痩内毒素休克小鼠肝脏核蛋白质组学研究博士研究生:陈腾祥导师:姜勇教授摘要脓毒症是感染引起的全身炎症反应征候群,、烧伤和手术后病人最主要的死亡原因之一。统计表明,临床半数的脓毒症是由于革兰氏阴性菌猲起的,在革兰氏阴性菌的细胞壁上的脂多糖琇虺莆内毒素蝗衔J歉锢际弦跣跃鹋Ф局⒌闹饕W饔梅肿印广泛作用于机体多组织器官,其中内皮细胞、巨噬细胞和中性粒细胞是最主要的效应细胞,在拇碳は拢遣罅康南赴蜃樱础跋赴蜃臃绫,进而引起失控性的炎症级联反应,最终引起内毒素休克、组织损伤和多器官功能障碍。因此,脓毒症或内毒素休克的分子机制的研究大多聚焦在内皮、巨噬细胞和中性粒细胞上,而在其它组织和器官上的相对研究较少。其实,脓毒症是多组织器官和系统的疾病,疾病从菌血症、毒血症萁叫菘恕⒍嗥鞴俟δ苷习墓讨校坏ú≡⑸锛其毒性产物会与机体组织器官发生相互作用,而且各组织器官之间也会发生错综复杂联系,共同促进疾病的发生发展和转归。肝脏是人体代谢的枢纽,也是重要的免疫器官,血液中大量蛋白也是由肝脏合成分泌的。在脓毒症的炎性应激刺激下,肝脏大量合成分泌急性期蛋紅珹,发挥一种启动迅速的机体防御机制,然而肝脏对病原微生物或其毒性产物产生什么样的反应,与及脓毒症或感染性休克发生发展进程中肝脏自身变化如何卧嗤ü么样的分子调控机制上调多种炎症相关反应蛋白的表达杂谡庑┪侍猓壳所知有限。这些问题的解答,对于了解错综复杂的脓毒症及其感染性休克的发病机制无疑是有益的。针对肝脏在感染性休克时介导产生多种炎症相关蛋白这一复杂过程,本课题通过检查脓毒症及感染性休克发生发展进程中肝脏组织的变化,从分子机制上了解肝脏在这种疾病条件下所做出的反应。本研究选用了/∈蟮母卧博士学位论文
作为研究对象,利用魑4碳ひ蜃樱票改诙舅匮V脓毒症主要类型和内毒素休克腥拘孕菘说闹饕@嘈的动物模型,从而获取这种疾病状态下的肝脏组织。然而,选择什么样的研究策略对组织器官进行有效的分子机制的研究成为本课题的关键。传统的研究方式是单分子或几个分子的研究,其优点是研究问题集中,容易深入,可以比较透彻地回答一个点上的问题,但是将这个结果放到一个体系层面上,其功能又变得扑簌迷离,而由点到面的形成过程又需要较长时间。随着人类基因组计划琀耐瓿伞蛋白质组学的方法技术和理论系统已成为后基因组时代的主旋律。这为我们用系统的观点来研究问题提供了机遇。本课题是从一定的体系上来提出问题,因此可以探索用蛋白质组学的策略来开始研究。早期的蛋白质组学主要是解决结构学的问题,即解析特定细胞、组织或器官所有蛋白质的集合。随着工作的积累,结果数据的急剧膨胀,人们发现要解析庞大的蛋白质数据是一个巨大的挑战。因此提出了功能蛋白质组学母拍睿ü钜斓鞍字首檠际酰罢不同生命过程或疾病过程状态下出现的差异蛋白,从而找到与这些生命过程或病理过程功能相关的蛋白质集群。本研究拟通过差异蛋白质组学技术来寻找肝脏组织内与内毒素休克相关的蛋白质。然而,在肝脏组织里,蛋白质的种类相当复杂,而且细胞外基质鞍紫嗟狈岣唬庑┑鞍子爰跋胞内的结构性蛋白的含量占据了肝脏蛋白质组的主要部分,而一些功能性蛋白往往表达丰度很低,在蛋白质组分离过程中,由于上样量有限,高丰度蛋白的存在会使低丰度蛋白很难被检出。所以我们希望通过提取亚细胞蛋白质组来富集低丰度蛋白。亚细胞蛋白质组相对于全细胞或组织蛋白质组相对单纯得多,解析起来相对容易,而且可以使我们研究的问题更加集中,所以我们首先选择了细胞核来进行研究。另外,疾病的发生发展是一个动态的过程,仅仅进行一个对照组和一个实验组的差异比较很难解释疾病发生发展的机制。因此我们需要选择疾病发生发展过程中的多个时间点来进行比较分析,观察蛋白质的动态差异。根据上述思考,我们利用粗谱髂诙舅匦菘薆痗小鼠模型,分别提取碳ず男∈蠹罢6哉兆樾∈肝脏的核蛋白来进行研究。要实现多组差异图谱的比较,分离技术的稳定性和重复性是获得可靠结果的关键性问题,
妇阧技术,利用流动Ⅱ眕,.吹鞍字实氖杷远缘鞍字式蟹掷搿U馓紫低车由于在不同的胶上分离蛋白、过程复杂和人为影响因素太大等原因而使重复性相对较差,不太适应于动态差异蛋白质组学。而其近年来的瓺男路⒄梗光差异显示双向凝胶电泳瓺虽然具有很好组问可比性,但是在同一块胶内最多也只能分离样品,同样不能达到本实验比较檠返囊G蟆6咝б合嗌狧是近年发展起来的蛋白分离新技术,其主要的特点是分离过程