文档介绍：高效液相色谱分析
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基本概念与特点
概念:高效液相色谱法(HPLC)是在20世纪60年代末,以经典液相色谱为基础,引入了气相色谱的理论,在技术上采用了高效固定相、高压输液系统和高灵敏度的在线检测器,从而发展起来的一种新型分离分析技术。随着科学和技术的不断改进与发展,目前已成为应用极为重要、广泛的分离分析手段.
特点:分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。
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液相色谱流程与原理
基本原理:混合组分的样品在色谱柱中,各组分由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用力的不同,随流动相在色谱柱中运行时,在两相间进行反复多次分配过程,使得原来分配系数具有微小区别的各组分,产生了保留能力明显差异的效果,进而各组分在柱中的移动速度不同,经过一定长度的色谱柱,彼此分离开来,最后按一定顺序流出。
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色谱图及相关名词
(一)色谱流出曲线—色谱图
色谱图是色谱柱流出物通过检测器所产生的响应信号对时间或液体流出体积的曲线。
色谱流出曲线是色谱基本参数的源流,而色谱基本参数又是用来观察色谱行为和研究色谱理论的重要指标。另外,还可以直接利用色谱图峰位置点(特征保留值)进行定性,根据曲线上测得的峰高或峰面积进行定量。
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(二)柱效能
色谱柱在色谱分离中由动力学因素所决定的柱效能,通常用塔板高度或塔板数表示。
塔板数:

塔板高度:
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涡流扩散相
分子扩散相
流动相线速度
传质阻力相
(三)分离度R
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分离度的表达式:
tR(2), tR(1): 组分2和组分1的保留时间
Wb(2), Wb(1): 组分2和组分1的峰底宽度
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R=
完全分离
高效液相色谱系统
(一) 高效液相色谱仪结构流程
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高压泵
色谱柱
废液
检测器
进样器
储液瓶
高压输液泵、高效分离柱、高灵敏度检测器
(二) 高压输液系统(高压泵)
高压输液泵是核心部件,要求:密封性好,输出流量恒定,压力平稳,可调范围宽,便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等。

高压泵主要有恒流泵(往复泵)和恒压泵(气动泵)两种。
恒流泵特点输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关。分为机械注射泵和机械往复泵(常用)两种。
恒压泵特点能保持输出压力恒定,但其流量则随色谱系统阻力而变化,故保留时间的重视性差。
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电动机偏心轮柱塞
柱球形单向阀溶剂
图10-7 柱塞往复泵示意图