文档介绍：蛋白质
蛋白质的分类和性质
蛋白质的分离和纯化
蛋白质的结构
蛋白质的分离和纯化
蛋白质的分离
蛋白质的纯化
重点掌握——
蛋白质分离纯化的基本方法
蛋白质的分离
(一)细胞破碎:
研磨、超声、冻融、酶解等方法。
(二)抽提
根据蛋白质的溶解性用适当溶剂来抽提,总的原则是要制备的蛋白质溶在什么溶剂中就用什么溶剂来抽提。
(三)分离
离心-除去固体杂质
盐析/等电点沉淀/有机溶剂沉淀-得到蛋白粗制品
蛋白质的纯化
透析
离心沉降
凝胶色谱
等电点沉淀
盐析
有机溶剂沉淀
离子交换色谱法
电泳法
4. 根据吸附性质不同
吸附色谱法
亲和色谱法
根据分子量大小不同-
1. 透析(dialysis)
原理:
蛋白质大分子不能通过半透膜,其他小分子(无机盐、氨基酸、单糖、小肽等)可以通过半透膜。
将要纯化的蛋白质溶液盛入半透膜袋内放在水中,让无机盐等小分子物质扩散到水中去而除去。
根据分子量大小不同- 2. 离心沉降 (最常用的蛋白质分离方法)
原理:
当物体围绕一中心做圆周运动时,运动物体受到离心力的作用。旋转速度越高,运动物体受到的离心力越大。在相同的转速下,容器中不同大小的高分子溶质会以不同速率沉降。经过一定时间的离心操作,就可实现不同物质的分离。
2. 离心沉降
(高速<50,000rpm,超速> 60,000rpm)
控制不同的离心速度,可以分离蛋白质
蛋白质颗粒沉降速率取决于
离心机转速
蛋白质颗粒大小、分子形状
溶液密度、性质等
凝胶色谱(也称体积排阻色谱、分子筛色谱)
凝胶颗粒特性:多孔网状结构
分离机制:
比凝胶网孔大的分子不能进入网孔,先流出
比凝胶网孔小的分子能进入网孔,后流出
常用的凝胶:
葡聚糖凝胶(商品名Sephadex)—常用
琼脂糖凝胶(商品名因生产厂家而不同)
聚丙烯酰胺凝胶(商品名Bio-GelP)
根据分子量大小不同-
思考题
以下蛋白质混合物用Sephadex G-200凝胶色谱分离,将以何顺序被分别洗脱下来:肌红蛋白(相对分子质量=16 000),过氧化氢酶(相对分子质量=500 000),细胞色素C(相对分子质量=12 000),胰凝乳蛋白酶原(相对分子质量=26 000),血清白蛋白(相对分子质量=65 000)。
注: Sephadex G-200颗粒孔径排出相对分子质量高限为200 000)