文档介绍：山东大学
博士学位论文
小分子化合物对人肺腺癌A549细胞的凋亡诱导及凋亡分子机制
的研究
姓名:杜爱英
申请学位级别:博士
专业:细胞生物学
指导教师:苗俊英
20060315
论文作者签名:奴导师签名:应丝复燃垄笸‘亟』:豪原创性声明关于学位论文使用授权的声明献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关附件一本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡承担。论文作者签名:期:本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。C苈畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑日
小分子化合物对人肺腺癌细胞的凋亡诱导及凋亡分子机制的研究中文摘要研究背景和研究目的近年来,肺癌已成为诸多国家中危害最大的癌患,我国已成为世界上第一肺癌大国。肺癌死亡率居于各种恶性肿瘤之首位。在肺癌中,肺腺癌最常见、发病率最高。因此,治疗肺腺癌对于降低肺癌死亡率极其关键。然而迄今为止,肺腺癌细胞凋亡分子机制尚未搞清,阻碍了肺腺癌的有效治疗。所以,阐明肺腺癌细胞凋亡分子机制具有重要性和必要性。化学遗传学的诞生为研究肿瘤细胞凋亡分子机理提供了新思路。如,依据化学遗传学,利用小分子干预直肠癌细胞信号网络,发现:上调癎鞍妆泶铮せ頙通路,诱导槐湫椭背Π┫赴期进入凋亡程序;再如,小分子—扇湃橄侔┑榷嘀种琢鱿赴种蛋白功能,降低线粒体膜电位,激活,.盏枷赴蛲觥W柿表明:小分子化合物能直接作用于靶蛋白、可高度实时性地研究细胞内动态变化过程,是研究信号传导的有力工具。据上述背景,本研究目的在于:从化学遗传学角度出发、以小分子化合物为凋亡诱导工具,干预细胞信号传导网络,研究肺腺癌细胞凋亡分子机制。以细胞为例研究肺腺癌细胞凋亡分子机制,原因在于:第一属于肺腺癌细胞系;第二细胞通常作为一种标准模式细胞,用来研究肺癌治疗。目前对于细胞凋亡的研究较为零散,从化学遗传学出发,利用小分子化合物进行有效干预,进而系统完整性地研究细胞凋亡分子机制,在国际上尚属首例。本研究所使用小分子化合物为:’,籩籦,及黄樟素氧化物乙基衍生物..一珽K蔷醋杂诒究翁庾榈男》山东大学博士论文
研究内容研究方法子化合物库。本组已往研究发现,诱导人脐静脉血管内皮细胞分别由一凇期进入凋亡程序。由于细胞凋亡分子机理极其复杂,不同类型细胞的凋亡机制不同:即使同类型细胞,当受到不同凋亡信号刺激时,凋亡机制也往往存在差异。能否诱导细胞凋亡蛲分子机制怎样壳埃形从斜ǖ溃疚亩源私辛颂剿鳌本研究不但有助于明晰肺腺癌细胞凋亡的分子机理,而且可为开发肺腺癌治疗药物提供理论依据。醪缴秆⌒》肿踊衔ㄐ》肿踊衔锒訟赴牡蛲鲇盏甲饔芯緼赴蛲鲇胂赴芷诜植肌基因表达之间的关系芯拷榈糀赴蛲龅闹匾7肿蛹靶藕磐治鲂》肿踊衔锒詂募せ钋榭甅法检测细胞存活率,由此对小分子化合物进行初步筛选。赴蛲黾觳夥椒ㄈ缦拢倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;透射式电子显微镜观察细胞空泡化及染色质凝集现象:吖啶橙染色騂ü馊旧ǎ⒗眉す馍韫簿劢显微镜或荧光显微镜,观察细胞核形态学变化;觳庖耘卸舷赴欠窕邓馈魇较赴跫觳庀赴芷诜植记榭觥庖呦赴Хń岷霞す馍韫簿劢瓜晕⑹酰觳鈖、膜整联蛋白鞍姿交蚍植急浠甒进一步检测、蛋白水平变化。比色检测试剂盒分析,一富钚员浠荧光检测试剂盒分析,酶活性变化。山东大学博士论文瓵
研究结果》肿踊衔锍醪缴秆〗峁ḿ觳庀赴婊盥:,显著降低细胞存活率:/在—冢偈瓜赴婊盥氏灾韵降。但是,鲋骋种菩Ч坑贓。:/、膜泡化、产生凋亡小体等特征,并从皿底脱落死亡。.吖啶橙染色结合激光扫描共聚焦显微术检测发现:/处理细胞保旧誓⑾赴似匣⒉⒉蛲鲂体;而对照组中,细胞核保持完整,呈现均匀的亮黄绿色。.觳夥⑾郑篠//处理细胞保攵哉兆橄赴比,培养液中富钆ǘ缺浠幌灾。流式细胞术检测发现:痬饔糜贏赴保攵哉兆相比,.谙赴俜质灾仙保珿瓽诩癎甅期细胞百分数明显上升,谙赴俜质蠓认陆抵。免疫细胞化学法结合检测发现:/处理细胞琾蛋白水平显著上调;⑸。检测发现:痬鞟赴攵哉兆橄啾较,、..倍妒..倍。鞟赴觳鈉富钚苑⑾郑河攵哉兆橄比较,,一富钚约灾銮琍.: