文档介绍：生物技术制药
第一章 绪论
药学一级学科分类：药品化学、药剂学、药理学、药品分析、生药学及微生物和生化药学二级学科
★生物技术和生物技术药品概念
生物技术药品分类
按用途分类：诊疗药品、预防药品、作为诊疗药品(免疫诊疗试剂、酶诊疗试剂、器官功效诊疗药品、放射性核素诊疗药品、诊疗用单克隆抗体(McAb)、诊疗用DNA芯片)
按作用类型分类：细胞因子类药品、激素类药品、酶和辅酶类药品、疫苗、单克隆抗体药品、反义核酸药品、RNA干扰(RNAi)药品、基因诊疗药品
按生化特征分类：多肽类药品、蛋白质类药品、核酸类药品、聚乙二醇(PEG)化多肽或蛋白质药品
★生物技术药品特征
理化性质特征：相对分子量大、结构复杂、稳定性差
药理学作用特征：活性和作用机制明确、作用针对性强、毒性低、体内半衰期短、有种属特异性、可产生免疫原性
生产制备特征：药品分子在原料中含量低、原料液中长存在降解目标产物杂质、制备工艺条件温和、分离纯化困难、产品易受有害物质污染
质量控制特征：质量标准内容特殊性、制造项下特殊要求、检定项下特殊要求(原液、半成品及成品检定等等)
第二章 基因工程制药
蛋白类药品特点：结构确证不完全性、含有种属特异性、多功效性、免疫原性
临床前安全性评价特殊性：蛋白类药品安全性担忧性质和起源；受试物纯度；相关动物选择；给药剂量选择；免疫原性；遗传毒性和致癌性(通常不进行常规遗传毒性试验)；药代动力学
真核细胞表示制品安全性问题：生产细胞DNA残留影响、生产用血清影响
基因工程药品稳定性研究相关问题：药品浓度、温度、湿度和水分、氧、光照、pH
基因工程药品缺点：生物利用度低，半衰期短；异体蛋白含有免疫原性
基因工程菌修饰改造方法：构建突变体、构建融合蛋白、PEG修饰(降低免疫原性、增加水溶性、延长t1/2)
基因工程制药基础步骤
上游阶段：制备目标基因→构建重组质粒→构建工程细胞
下游阶段：培养工程细胞→分离纯化产物→除菌→半成品、成品检定→包装
基础工具：目标基因、多种酶(切割酶、连接酶、修饰酶等)、载体、宿主细胞
酶切结果：5’粘性末端、3’粘性末端、平头末端
1U核酸内切酶酶活性：指在最好反应条件下反应1小时，完全水解1mg标准DNA所需酶量
影响限制性内切酶反应原因：
DNA样品纯度：
DNA甲基化程度：核酸限制性内切酶不能够切割甲基化核苷酸序列。在基因克隆中要使用甲基化酶缺点型细菌菌株制备质粒DNA。
酶切反应温度
DNA分子结构
反应缓冲液组成
反应时间、反应体积等
工具酶
核酸限制性内切酶：识别、水解外源双链DNA分子上特定核苷酸序列。关键存在于原核微生物中。
同裂酶：指起源不一样，识别序列相同酶；进行一样切割，产生相同末端
同尾酶：起源不一样，识别序列不一样，但产生相同粘性末端
DNA甲基化酶：含有宿主专一性，对宿主本身DNA上特定核苷酸进行甲基化修饰，避免被本身限制性内切酶水解
DNA连接酶
T4噬菌体连接酶：连接双链DNA切口，或带粘性末端或平头末端DNA片段
大肠杆菌DNA连接酶：连接双链DNA切口，或带粘性末端DNA片，不能连接带平头末端DNA片段
聚合酶：以DNA或RNA为模板，将核苷酸连续加至3’-OH末端，合成方向为5’→3’。DNA聚合酶、RNA聚合酶
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ：5’→3’DNA聚合酶活性；5’→3’DNA外切酶活性；3’→5’DNA外切酶活性；RNA H酶活性
Klenow酶：不含有5’→3’DNA外切酶活性
T4噬菌体DNA聚合酶：不含有5’→3’DNA外切酶活性。外切酶活性比Klenow酶强200倍，对单链DNA作用强于双链DNA
T7噬菌体DNA聚合酶：不含有5’→3’DNA外切酶活性
Taq DNA聚合酶
反转录酶：催化以RNA或DNA为模板，合成DNA；含有RNA H酶活性
末端脱氧核苷酸转移酶：催化dNTP沿5’→3’聚合，逐一加于线性DNA分子3’末端；不需要模板
载体：(vector)起源于质粒、噬菌体或病毒DNA分子，可供插入或克隆目标基因或DNA，并含有运载外源DNA导入宿主细胞能力。
质粒载体：共价闭合环状DNA(cccDNA)；开环DNA(ocDNA)；线状DNA(lDNA)
质粒三个关键性质：遗传传输能力；遗传交换能力；不相容性
用于克隆质粒三个要素：复制子、选择标识、多克隆位点
常见质粒载体：克隆载体、表示载体、突变载体、汇报载体
λ噬菌体载体：插入型载体、置换载体
起源于噬菌体DNA，因能够插入较大DNA片段，常见于构建基因组文库和cDNA文库。
目标基因常见制备方法
化学合成法：前提：基因DNA序列已知。小于1