文档介绍：广州医学院
硕士学位论文
多药耐药铜绿假单胞菌耐药机制的研究
姓名:彭咏麟
申请学位级别:硕士
专业:临床检验诊断学
指导教师:吴爱武
2011-06-01
广州医学院硕士学位论文铜绿假单胞菌的耐药机制分析
多药耐药铜绿假单胞菌耐药机制的研究
专业:临床检验诊断学
研究生:彭咏麟
导师:吴爱武
中文摘要
目的
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA),是一种重要的医院内感染病原菌,
为条件致病菌。由于铜绿假单胞菌具有先天和后天的多药耐药性,对各种抗生素的
耐药率不断上升,从而导致其引起的医院感染性疾病治疗越来越困难。本研究通过
对临床标本分离的铜绿假单胞菌的耐药特点进行分析,检测其主动外排泵,初步探
讨主动外排泵在该菌耐药中的作用;同时也对临床分离的32株多药耐药铜绿假单胞
菌的耐药特点进行分析,进一步检测其外膜蛋白oprD2基因、β-内酰胺酶相关基因、
氨基糖苷类耐药基因、整合酶基因及其整合子携带的耐药基因盒等,以期从整体上
了解多药耐药铜绿假单胞菌的耐药规律以及其耐药基因在菌株间水平传播的特点,
从而为临床上合理使用抗生素提供参考。
方法
1. 铜绿假单胞菌临床分离株主动外排泵的检测与分析
收集2008年9月—2009年9月广州医学院第一附属医院临床标本中分离到的60株
铜绿假单胞菌,采用K-B法检测铜绿假单胞菌临床分离株对9种常用抗生素(庆大霉
素、氨曲南、头孢他啶、亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星、左
氧氟沙星、多粘菌素B)的耐药情况;CP)对四种
药物(羧苄青霉素、红霉素、亚胺培南、庆大霉素)的琼脂稀释法抑制试验分别检
测铜绿假单胞菌四种外排泵(MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-
OprM)的表型;同时应用PCR方法检测MexAB-OprM外排泵调节基因mexR的变异情
况。
Ⅰ类整合子及其耐药基因盒的检测与分析
广州医学院硕士学位论文铜绿假单胞菌的耐药机制分析
收集2008年—2010年广州医学院第一附属医院临床分离标本中分离的32株多药
耐药铜绿假单胞菌(multi-drug resistant Pseudomonas aeruginosa,MDRP),通过PCR
方法检测其整合酶基因(integrase)和Ⅰ类整合子遗传标志物qacEΔ1-sull基因以分析
其整合子类型;通过对整合子的可变区耐药基因盒的检测和对其可变区PCR产物进行
限制性片段长度多态性分析来了解其耐药基因的携带情况。
、β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷
类耐药基因的检测与分析
对 32 株多药耐药株采用 K-B 纸片法检测其对 8 种常用抗生素(氨曲南,环丙沙
星,头孢吡肟,庆大霉素,亚胺培南,氨苄西林,复方新诺明,哌拉西林/他唑巴坦)
的耐药水平;通过 PCR 方法检测外膜孔蛋白 oprD2 基因以分析其缺失情况;通过 PCR
检测 B 类金属酶相关基因 NDM-1、IMP、GIM、VIM、SPM、GES、KPC 型基因了
解 B 类金属酶的产生情况;通过 PCR 检测氨基糖苷类耐药基因以了解它在多药耐药
株耐药中的作用;通过多重 PCR 检测 OXA 型β-内酰胺酶基因和质粒型 AmpC 酶基
因,了解相应酶的存在情况。
结果
1. 60 株铜绿假单胞菌临床分离株对 9 种常用抗生素的耐药率依次为:庆大霉素
%(22/60),氨曲南 %(20/60),头孢他啶 %(19/60),亚胺培南 %
(17/60),阿米卡星 %(16/60),哌拉西林/他唑巴坦 %(14/60),环丙沙
星 %(13/60),左氧氟沙星 %(7/60),多粘菌素B为0;外排泵表型阳性
株依次为:MexAB-OprM 35 株,阳性率 %(35/60);MexXY-OprM13 株,阳
性率 %(13/60);MexCD-OprJ 11 株,阳性率 %(11/60);MexEF-OprN
10 株,阳性率 %(10/60)。35 株 MexAB-OprM 外排泵表型阳性株中有 28 株扩
增出 mexR 基因片段,检出率 %(28/35)。
2. 32株MDRP中有5株可扩增出整合酶基因,其阳性菌株中有4株qacEΔ1-sull基因扩
增阳性。在4株Ⅰ类整合子可变区中扩增出耐药基因的有3株。通过对可变区基因盒
的耐药基因分析(