文档介绍：二零~年四月导师袁正宏研究员导师组成员瞿涤教授童文燕博士复旦大学上海医学院教育部、卫生部医学分子病毒学重点实验室奉课题承国家传染病重大项目⑸虾J幸窖Я军人才项目和复旦大学重点学科博士生科研资助计划资助。
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互博士学位论文中文摘要丙型肝炎病毒非结构蛋白与细胞蛋白相互作用影响纲胞周期及其机制的研究博士生:王耀辉丙型肝炎病毒琀腥竞笸ǔT谔迥诒3值退礁粗疲但却极易引起慢性肝炎、。已知细胞周期的紊乱是肿瘤细胞发生的关键环节,一些与肿瘤发生相关的病毒感染均可引起细胞周期的紊乱。堑フ碦病毒,其基因组可编码包括结构蛋白和非结构蛋白在内的至少种病毒蛋白。其中是嗦氲姆墙峁沟鞍之一,=从斜ǖ称除直接参与粗仆猓箍梢酝ü,从而引起病变发生。已有报道提示蛋白可影响细胞周期进展,但不同研究小组所观察到的现象不太一致,且详细机制还不是很清楚。为确认对细胞周期的影响,首先在肝癌细胞系泄菇丝捎四环素调控的稳定表达细胞株>璆餐秆。钪盏玫降捅尘案哂盏急泶锏南赴寺盏己螅琋杀槐昵┛固搴湍谠葱钥固逋奔觳獾剑崾鞠赴系构建成功。然后利用流式细胞术在该细胞系中检测对细胞周期的影响。结果显示,诱导表达后,谙赴飨栽龆啵崾綨墒瓜赴芷赟为探讨影响细胞周期的分子机制,包括何种宿主蛋白参与该过程,应用醉母双杂交试验从肝细胞文库中筛选了可能与存在相互作用的细胞蛋白,发现细胞蛋白为候选蛋白之一。鉴于跟细胞周期相关,,免疫荧光激光共聚焦试验也观察到两者在胞浆核心区域存在部分共定位。截短体试验进一步表明两者之问的相互作用,且发现的┒烁涸鹩隢嗷プ饔茫鳱导师:裒正宏期延长。籭博±学位镕立中猤
染及相应空载体,流式捡授蜘胞周期变化。结果发现空载体转染组可进入两段氨基酸负责与相互作用。撮早是在细胞中以相互作用蛋白被发现,前期研究表明可与染色体结合,参与暮铣伞NA巳啡螩欠窬哂卸韵赴芷的调控功能,用胸腺嘧啶核苷使细胞同步化于细胞周期的/冢僮正常细胞周期,而转染组细胞仍停滞在期。用小干扰谠葱干扰后。谙赴灾龆唷U庑┙峁崾綜肥荡嬖诙韵赴芷诘调控功能。⑾郑河全长相比,\和空载体转染组细胞周期和细胞生长均不受影响,提示对细胞周期的影响依赖其与的结合。为了进一步探讨与相互作用之后影响细胞周期的分子机制,首先检测对的蛋白表达是否有影响。结果发现不同情况下的表达对的蛋白水平都没有明显改变。由于是胞核蛋自,而主要定位于胞浆,先前的共聚焦结果显示两者可在核周区域部分共定位,提示可能使发生了亚细胞定位的改变。激光共聚焦试验验证了这个假设:全长可使原本在核内的重新定位于胞浆,而不与结合的截短体△则不具备这个功能。同时,在腔髯楦粗谱雍拖赴嘌《:将腥竞蟮赴中ù茨D饴愿腥竟蹋驳玫嚼嗨频慕峁鹕朔从,是鹕朔⑸钡骺叵胞周期的重要信号通路。鹕朔⑸螅腥鱿赴芷诩觳榈憧杀患せ睿/谧柚瓜赴隨期;谝种艱合成:/诜乐顾鹕说腄继续分裂。近辫有报道显示也可参与鹕朔从ν凡⒕哂形只组稳定性的作用,提示赡芙榈剂薔疌嗷プ饔煤笙赴芷诘奈乱。因为使从核到浆的移位减少了核内发挥功能的的量,用扇胖苯酉碌鰿蠓⑾諨通路中的可对诮械骺氐闹匾7肿显著降低而蛎飨陨摺S氪讼嘁恢拢琋盏急泶锖髉、灿忻飨韵碌髑铱杀籆墓泶锼糠只馗础U庑┙峁崾綨能通过与相互作用影响了方韵赴芷诓跋臁与的相互作用可使发生从胞核到胞浆的移位,从而影响了罚瓜赴鸖期延长。这为深入了解中上述结果表明博±学位论文中文摘Ⅲ
●口性感染和肿瘤发生的机制开辟了新的思路关键词:丙型肝炎病毒;非结构蛋白;结合蛋白;鹕朔从Γ合互作用:细胞周期中图分类号:
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