文档介绍：重庆医科大学
博士学位论文
丙型肝炎病毒核心蛋白抑制RNA干扰的机制研究
姓名:陈维贤
申请学位级别:博士
专业:内科学(传染病学)
指导教师:黄爱龙
20070301
雌英汉缩略语名词对照异丙基一硫代..沪半乳糖苷英文缩写英文全称中文译名ξ舛氨苄青霉素碱基对牛血清白蛋白互补焦碳酸二乙酯脱氧核糖核酸脱氧核糖核苷三磷酸双链二硫苏糖醇溴乙锭乙二胺四乙酸增强型绿色荧光蛋白乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒辣根过氧物酶人类免疫缺陷病毒千碱基加氨苄青霉素的培养基翻:轪胎牛血清绿色荧光蛋白肝细胞癌千道尔顿荰鋜—重庆医科大学博士研究生学位论文,丑緄
嘣培养基毫克分钟毫升信使核糖核酸核苷酸光密度聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液聚合酶链反应盏嫉某聊春衔核糖核酸扇每分钟转速十二烷基硫酸钠短发夹状小干扰/乙酸电泳缓冲液/硼酸电泳缓冲液三羟甲基氨基甲烷微升微克讳逡一氯一贿胚嵋豢醢肴樘苷纳克新生小牛血清耐热酆厦籧籭——重庆医科大学博士研究生学位论文/
学位论文作者签名:雌日期:三s蒙重庆医科大学研究生学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书论文作者签名:指导教师签名:,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,,,即:,,,可以采用影印,缩印或其他手段保存论文.
丙型肝炎病毒核心蛋白抑制扇抛饔玫幕蒲芯摘要扇攀嵌参锾迥诤怂崴降囊恢止爬系目共《痉绞健P矶嗖毒可以编码蛋白质来对抗这一作用。丙型肝炎病毒常常引起慢性感染,并导致慢性丙型肝炎及肝癌。作为一种单链《荆透窝撞《可能受到宿主细胞的扇盘逑档墓セ鳎嘤锌赡懿鶵干扰抑制因子来逃避宿主这一抗病毒反应。为验证这一推测,本研究分别建立了针对绿色荧光蛋白和虫荧光素酶基因的扇盘逑担糜赗干扰抑制因子的筛选实验。利用已经建立的扇盘逑刀员透窝病毒的编码一些蛋白质进行了筛选,发现核心蛋白能够抑制起的扇畔窒螅溆嗟鞍字饰捶⑾掷嗨谱饔谩U庵侄钥棺饔迷诙种细胞系里得到验证,且呈剂量依赖关系。通过构建系列缺失突变体,发现核心蛋白税被崾寝卓筊干扰所必需的。当用于导的扇盘逑凳保⑾趾诵牡鞍撞荒芏钥箂介导的扇体系。提示核心蛋白是通过抑制男纬煞⒒右种芌干扰的作用。由于没有发现核心蛋白对细胞内泶锼酱嬖诿飨越档陀响,推测可能是通过结合⒁种屏似浠钚浴N颐抢妹庖吖渤淀技术证实了核心蛋白能够结合细胞内刈楸泶锏暮诵牡鞍在体外实验中能够抑制运碦的切割作用。因此本研究结论认为:丙型肝炎病毒核心蛋白能够对抗宿主细胞的机制,这种对抗作用是通过结合并抑制幕钚允迪值摹:诵牡鞍椎恼庵止国家自然科学基金青年基金项目,重庆市自然科学基金重点项目手翁重庆医科大学博士研究生学位论文
能可能有利于提高丙型肝炎病毒生存能力并导致持续感染,亦可能在第一部分扇乓种埔蜃由秆∧P偷慕目的建立稳定表达绿色荧光蛋白的细胞株,构建短发夹表达质粒并观察其对内源性囊种谱饔茫⒛谠葱月躺ü獾方法转染至赴肎秆』竦梦榷ū泶颎丙型肝炎病毒致病尤其是是致瘤中发挥重要作用。【关键词】:丙型肝炎病毒,核心蛋白,扇牛种埔蜃樱珼第一节短发夹状扇拍谠葱月躺ü獾鞍椎谋泶白为靶基因的扇盘逑怠的细胞株.;设计合成针对虻膕对应的片段,插入转录载体菇╯表达载体,转染细胞瓽,荧光显微镜观察细胞荧光强度,以检测鞍姿剑訰狿检测水平。结果筛选得到的细胞株瓽能够稳定表达绿色荧光蛋白,利用椒ù酉赴蜃镈中检测到颍怀晒菇╯的表达质粒,该载体表达的—芄幌灾种葡赴心谠葱訥的表达。结论虺晒φ现罤细胞基因组中,—芄幌灾抑制内源性谋泶铮Ч惫劭煽浚孟低衬芄挥糜赗干扰机制等研究中。【关键词】:扇牛躺ü獾鞍祝谭⒓凶碦第二节扇偶际跻种瞥嬗ü馑孛富虻谋泶目的研究载体表达的短发夹状双链及化学合成的重庆医科大学博士研究生学位论文
对虫荧光素酶基因表达的特异性抑制作用,建立扇诺亩糠治方法构建针对虫荧光素酶基因的泶镌靥俺嬗光素酶和海肾荧光素酶双表达载体狥,化学合成针对虫荧光素酶基因的玴皊分别与沧H赴谧H竞收集细胞,利用双荧光素酶分析系统检测荧光素酶活性。结果成功构建了针对虫荧光素酶基因的泶镌靥澹迷靥灞泶的芄幌灾碌鞒嬗ü馑孛富虻谋泶铩;Ш铣傻膕显著降低了