文档介绍：甘肃农业大学
博士学位论文
临床型奶牛乳房炎乳腺组织亚细胞比较蛋白质组学研究
姓名:王建锋
申请学位级别:博士
专业:临床兽医学
指导教师:赵兴绪
20090601
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摘要本研究运用亚细胞比较蛋白质组学的研究策略和技术方法,以奶牛乳腺组织电泳分离蛋白质,软件分析凝胶图谱的蛋白质表达模式,筛选差异表达蛋白斑点。质谱及生物信息学分析鉴定蛋白质,获得了一些与乳房炎发生相关的乳腺线粒体、细胞核、溶酶体、高尔基体差异表达的蛋白,并对差异表达蛋白在奶牛乳房炎发生过程中的作用机制进行了分析和探讨。通过差速超离心将奶牛乳腺组织匀浆分离为和沉淀三个亚细胞组分,为密度梯度介质,超离心从恋砗沉淀中纯化出细胞核与线粒体,沉淀中纯化出溶酶体和高尔基体,酶活力检奶牛乳腺线粒体、细胞核、溶酶体、高尔基体四个亚细胞组分的图谱能得到鲎笥业牡鞍装叩恪2⒎⑾窒吡L濉⑾赴说鞍字试谌赴缬就计中基本未得到显现,亚细胞分级大大提高了低丰度蛋白质的检出效率。奶牛乳腺组织中差异表达的蛋白是一些与细胞能量代谢、细胞迁移、分子伴侣、抗凝机制、抑制炎症反应、细胞分化、信号转导等相关蛋白,它们可能参与了机体防御、抵抗进入奶牛乳腺病原体感染的过程。研究发现乳腺处于炎症状态时代谢加快一些线粒体酶,如牛线粒体福瓼⑴P南赴豤氧化酶、细胞色素春咸濉Ⅴ;、酰胺酸磷酸核糖基转移酶等表达量上调。,业鞍譇槐涮澹业鞍祝表达下调,失去了稳定乳汁的能力,导致乳汁凝结。乳腺发生炎症时,乳腺代谢加快,产生的能量增多,为了避免乳腺组织细胞损伤,谋泶锪考本缟仙在乳房炎发生过程中缺失,这也可能是乳房炎症发生所特有的生物标记分子,它的变化对乳房炎的反复发生可能有很大关系。膜连蛋白⒛ち鞍譇谌榉垦追⑸讨斜达量上调,可能对血液凝结和炎症过程具有调节作用,可作为新的炎症调节位点。抗炎相关的白蛋白在乳房炎发生过程中表达上调,抗菌防御酶乳过氧化物酶在乳为研究模型。通过超离心技术分离出细胞核、线粒体、溶酶体、高尔基体,双向测了细胞核和线粒体的纯化倍数。结果表明:与纯化前相比,线粒体和细胞核的纯度提高了蹲笥摇分别得到、个左右的蛋白斑点,奶牛乳腺匀浆瓺计字肃农业大学届博士学位论文
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乳房炎乳腺中表达下调。鏛球蛋白,硫氧还原蛋白表达下调;锌指蛋白在乳房炎发生过程中高表达,这些差异表达的蛋白也可能是乳房炎发生潜在的生物标记分子。通过本研究,探索了奶牛乳房炎新的诊断生物标记分子、潜在的炎症调节和治疗靶标,筛选了乳房炎抗性/易感性相关蛋白,探索其表达调控机理,为应用生物学方法预防和治疗奶牛乳房炎开辟了新途径,以及为进~步从蛋白质水平揭示、阐明奶牛乳房炎的发生机理奠定基础。关键词:奶牛;乳房炎;乳腺组织:线粒体;细胞核;溶酶体;高尔基体;二维凝胶电泳;质谱;亚细胞蛋白组;生物信息学软件。房炎乳腺表达下调;物质转运相关的蛋白质膜外孔通道蛋白,载脂蛋白甀在肃农业大学届博士学位论文
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符号说明英文缩写英文名中文名过硫酸铵差速离心密度梯度离心多相蛋白质鉴定技术肽指纹图谱苯甲基磺酰氟核孔复合体质谱技术一双向凝胶电泳舛乙腈牛血清白蛋白丙基硫酸盐二硫苏糖醇电喷雾离子化技术固相梯度碘乙酰胺基质辅助激光解吸飞行时间质谱鹕饲谐薷聪低聚丙烯酰胺凝胶电泳分子量序列覆盖率十二烷基硫酸纳亚细胞蛋白质组学硫脲./,
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⋯一繇￡毒乞;肫冢篔/年钿瑁独创性声明本人声明说所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得甘肃农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我~同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。甘肃农业大学博十学位论文
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——的研究。恚鼓闘月—赵诘际φ运托靼驹学位论文作者签名:多砻铸加厂九年乡月乳\年旦月廊罩签字日期:诳年∥月甘肃农业大学学位论文版权认定和使用授权书动物医堂院⒀宦畚闹邪难芯砍晒闹J恫ü檐谛檑招┨迷阎薄苴虚壅些太堂王建锤蝗±监瘥兽医堂轲统嵘轲飈照组组亚细胞出较蛋自厦组堂硒究指导下,从事塞直生殖生堡堂僮途塞的堑厦腿塑鱼王返现认定以下条款:⒈救吮弦岛蠓⒈碛胙芯磕谌萦泄氐奈恼拢髡叩谝皇鹈ノ晃8仕嗯┮荡笱А⒈救送耆私飧仕嗯┮荡笱в泄乇A簟⑹褂醚宦畚牡墓娑ǎ腥ūA舨⑾蚬矣泄部门或机构送交论文的纸质版和电子版,允许论文被查阅和借用。本人授权甘肃农业