文档介绍：南方医科大学
博士学位论文
LMP1<'+>/mCD99L2<'->A20诱导小鼠A20细胞转化为H/RS样细胞
的研究
姓名:陈小艳
申请学位级别:博士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:赵彤
20090518
痬。盏夹∈驛细胞转化为疪赴难芯博士研究生:陈小艳指导教师:赵彤教授摘要研究背景,且恢趾梅⒂诙椭星嗄甑牧馨/.琀/赴话阒徽贾琢鲎橹募俨糠%余是大量以淋巴细胞为主的背景细胞,如此少量的蟂细胞是如何生存于大量的庑┪侍多年来一直困扰着医学界。要探究这些悬而未决的问题,当务之急是建立类似人病理特征的淋巴瘤动物模型,观察疪赴氡尘跋胞之间的相互作用,以揭示疪赴妗⒃鲋场⒚庖咛颖堋⒚庖叩鹘诘幕疲这是本课题组多年来在国家自然科学基金资助下一直致力研究的核心问题。最近十几年来有关疪赴难芯咳〉昧撕艽蟮慕梗芯拷峁砻疪赴鹪从谏⒅行牡蛲銮癇细胞屑睟淋巴细胞基因结合核因现为对不同刺激产生一过性活化,,促进其增殖,,作为重要的转录调控因子,.调节很多基因表达,这些基因与细胞增殖、分化、免疫反应、凋亡、转化有着密博士学位论文霍奇金淋巴瘤’造血系统恶性肿瘤,它虽然是恶性淋巴瘤的一部分,但其组织病理学特征与非霍奇金淋巴瘤,截然不同,其恶性成分一疪的背景细胞之中的氡尘跋赴烤勾嬖谑裁垂叵疪赴侨绾畏⑸子畆堑鹘贐细胞分化和存活的重要转录因子,
基因沉默,经过在体外反复传代、克隆筛选和鉴定,建立了低表达基因的鼠类人疪赴P停锾迥诔闪鍪笛橐参茨艹闪觯蚨拗了本课题组对发病机制研究的开展。目前需要亟待解决的问题是,如何建立长期稳定表达基因和/或低表达虻氖罄嗳薍/细胞模型的鼠类人疪赴P停狙芯磕夤菇ê康幕騆闹刈槁《颈泶镌体,采用慢病毒转染细胞的技术,将外源基因导入靶细胞谇捌诳翁庋芯中文摘要切关系。,其潜伏膜蛋白ü。通过活化—信号传导通路,下调淋巴细胞的表达,可诱导出具有病理学特征的疪赴牟研究证实,将基因转染跣缘腂赴虸细胞,使蛋白表达减少或缺失的馨拖赴允境隽擞際/细胞类似的表型。本研究组前期将基因导入小鼠馨土鱿赴闍细胞后,部分细胞出现了疪赴男翁卣骷懊庖弑硇停醪浇⒘耸罄嗳薍/细胞模型;≈辏⑾制渲幸渤鱿至死嗳薍±硌卣鞯蟂样细胞。动物体内成瘤实验结果表明,≈暝谏镅匦苑矫嬗際/细胞也具有一定程度的相似性。然而令人遗憾的是,本研究组前期采用传统的脂质体转染法将基因转染小鼠馨土鱿赴闍,由于该细胞属于悬浮细胞,转染效率很低,而且所诱导出的疪赴蛟谔逋馀嘌眩饰茨艹晒⒊て谖榷ū泶慢病毒载体具有能感染分裂期和非分裂期细胞,使目的基因能在靶细胞内长期稳定表达的优势,而本课题组前期未能成功建立长期稳定表达基因结果的基础之上虻既胄∈驜淋巴瘤细胞株赴螅糠窒赴Ⅱ
目的出现了疪赴男翁卣骷懊庖弑硇,建立长期稳定表达基因的鼠类人疪赴P汀核细胞的实验研究,≈暌渤鱿至死嗳薍±硌卣鞯腍/样细胞的形态和免疫表型,⒊て谖榷表达基因同时低表达虻氖罄嗳薍/细胞模型。另外,本课题组前期将初步构建的表达基因的小鼠疪赴は陆又諦痗种具有健全免疫功能的/∈螅虺闪雎始ǖ停鑫.,显著低的动物模型方面遇到了另一个挑战。本研究需要解决的第二个关键问题是:如何提高鼠类人病理特征的样细胞在/筇迥诘某闪雎淋巴瘤为免疫系统恶性肿瘤,其发生与机体免疫状况有着密切的关系,研究表明几乎所有伴有患者的疪赴蠩的感染,提示的发生既与腥久芮邢喙兀币舶橛忻庖吖δ苋毕荨1狙芯磕饨獴痗小鼠经哒丈浜螅诮档推涿庖吖δ艿幕∩希菇ǖ谋泶風腁细胞以及表达同时低表达腖瓵克隆株皮下接种放射后的/∈螅岣呤罄嗳薍/细胞在/∈筇迥诘某闪雎剩观测鼠类人赴贐痗小鼠体内的生物学特性、免疫表型和病理特征,从而建立鼠类人病理特征的动物模型。菇ê康幕騆捅ǜ婊騝闹刈槁《颈泶镌靥澹新博士学位论文鉴于在跣缘腍赴闘泶風竽苡盏汲龈嗍康亩小鼠未能成瘤,再将低表达虻腖瓵克隆株皮下接于赴谄涮迥诘某闪雎/刮颐窃诠菇ㄊ罄嗳薍”涮卣毒包装和滴度测定。Ⅱ
根据臼褂檬植崽峁┑墓郊扑悴《旧锨逡旱牡味方法煌绞阶H臼笤葱訠淋巴瘤细胞株教中∠赴鸄最佳的转染方样细胞,构建长期稳定表达基因和/或低表达虻氖罄嗳薍/细胞模型一和痬。赴分别用传统的脂质体转染技术、新兴发展的核酸转染技术和慢病毒载体介导的转染技术,将重组慢病毒表达载体质粒甃甤高倍镜下对发荧光的细胞进行计数,根据以下公式计算转染效率:中文摘要式,为本研究后续工作奠定基础